胎牛血清（ FBS）存放與解凍方法分析
胎牛血清（Fetal Bovine Serum, FBS）是一種廣泛應(yīng)用于細胞培養(yǎng)領(lǐng)域的生物制品，具有豐富的營養(yǎng)成分和生物活性物質(zhì)，能夠支持細胞生長、分化和維持正常生理功能。胎牛血清是通過對未出生胎牛穿刺采血，經(jīng)過自然層析、離心、微濾等處理得到的上清液。主要成分包括蛋白、因子、激素等，具有提供營養(yǎng)、促進生長、保護細胞等功能。使用時需正確儲存、解凍和配制，避免反復凍融和靜置過久。
胎牛血清的主要成分：
①各種蛋白：白蛋白、球蛋白、纖連蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白等；
②因子：各種生長因子等；
③各種激素：胰島素、促生長激素、氫化可的松等；
④其他微量元素、維生素、離子等；
⑤不明確的成分：由于胎牛血清是天然生物制品，F(xiàn)BS中還存在部分不明確的生物成分。
胎牛血清的主要功能：
①提供營養(yǎng)：胎牛血清中的各種蛋白可提供細胞分裂所需的營養(yǎng)物質(zhì)
②促進生長：胎牛血清中的各種生長因子和激素可促進細胞生長
③保護細胞：胎牛血清帶有一定粘稠度，且有酸堿緩沖液的作用，可保護細胞
④提供蛋白酶抑制劑：提供蛋白酶抑制劑，中和剩余的胰蛋白酶的消化，保護細胞
⑤提供貼壁因子：胎牛血清提供貼壁因子，是細胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子的來源。
胎牛血清的正確存放與解凍是各位實驗家尤為關(guān)注的一個問題，經(jīng)過專業(yè)人員從其成分中分析，在保證質(zhì)量的前提下，胎牛血清的正確存放與解凍的方法，總結(jié)如下：
5、有必要做熱滅活嗎?
實驗顯示，經(jīng)過正確處理的熱滅活血清，對大多數(shù)的細胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進，或完全沒有任何作用，甚至通常因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量，而造成細胞生長速率的降低。而經(jīng)過熱處理的血清，沉淀物的形成會顯著的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察，像是“小黑點”，常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環(huán)境中，又會使此沉淀物更增多，使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。因此我們建議您，若非必須，您可以不需要做熱處理這一步。如此一來，不但節(jié)省您寶貴的時間，更確保血清的質(zhì)量!
6、為什么儲存在冰箱中的胎牛血清會出現(xiàn)少量沉淀?
胎牛血清沒有預老化，儲存在2-8℃時，血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。這應(yīng)該不會影響血清的質(zhì)量。推薦在-20℃儲存胎牛血清，避免反復凍融。
7、如何避免沉淀物的產(chǎn)生?
我們建議您在使用血清的時候，注意下列的操作：
解凍血清時請按照所建議的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫)，若血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃)，實驗顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。解凍血清時請隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生。
胎牛血清的主要成分：
①各種蛋白：白蛋白、球蛋白、纖連蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白等；
②因子：各種生長因子等；
③各種激素：胰島素、促生長激素、氫化可的松等；
④其他微量元素、維生素、離子等；
⑤不明確的成分：由于胎牛血清是天然生物制品，F(xiàn)BS中還存在部分不明確的生物成分。
胎牛血清的主要功能：
①提供營養(yǎng)：胎牛血清中的各種蛋白可提供細胞分裂所需的營養(yǎng)物質(zhì)
②促進生長：胎牛血清中的各種生長因子和激素可促進細胞生長
③保護細胞：胎牛血清帶有一定粘稠度，且有酸堿緩沖液的作用，可保護細胞
④提供蛋白酶抑制劑：提供蛋白酶抑制劑，中和剩余的胰蛋白酶的消化，保護細胞
⑤提供貼壁因子：胎牛血清提供貼壁因子，是細胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子的來源。
胎牛血清的正確存放與解凍是各位實驗家尤為關(guān)注的一個問題，經(jīng)過專業(yè)人員從其成分中分析，在保證質(zhì)量的前提下，胎牛血清的正確存放與解凍的方法，總結(jié)如下：
1、保存血清最好的方法?
我們建議血清應(yīng)保存在-5℃至-20℃。然而，若存放于4℃時，請勿超過一個月。若您一次無法用完一瓶，建議您無菌分裝血清至恰當?shù)臏缇萜鲀?nèi)，再放回冷凍。
2、如何解凍血清才不會使產(chǎn)品質(zhì)量受損?
我們建議您將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過程中必須規(guī)則地搖晃均勻。
3、血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn)，該如何處理?
血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因，但最普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成，而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后，也會存在于血清中，亦是造成沉淀物的主要原因之一。但少量這些絮狀沉淀物，并不影響血清本身的質(zhì)量。
若您欲去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi)，以400g 稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物，因為它可能會阻塞您的過濾膜。
4、為什么要熱滅活血清?
加熱可以滅活補體系統(tǒng)。激活的補體參與溶解細胞事件，刺激平滑肌收縮，細胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學研究，培養(yǎng)ES 細胞，昆蟲細胞和平滑肌細胞時，推薦使用熱滅活血清。
我們建議血清應(yīng)保存在-5℃至-20℃。然而，若存放于4℃時，請勿超過一個月。若您一次無法用完一瓶，建議您無菌分裝血清至恰當?shù)臏缇萜鲀?nèi)，再放回冷凍。
2、如何解凍血清才不會使產(chǎn)品質(zhì)量受損?
我們建議您將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過程中必須規(guī)則地搖晃均勻。
3、血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn)，該如何處理?
血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因，但最普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成，而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后，也會存在于血清中，亦是造成沉淀物的主要原因之一。但少量這些絮狀沉淀物，并不影響血清本身的質(zhì)量。
若您欲去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi)，以400g 稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物，因為它可能會阻塞您的過濾膜。
4、為什么要熱滅活血清?
加熱可以滅活補體系統(tǒng)。激活的補體參與溶解細胞事件，刺激平滑肌收縮，細胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學研究，培養(yǎng)ES 細胞，昆蟲細胞和平滑肌細胞時，推薦使用熱滅活血清。
5、有必要做熱滅活嗎?
實驗顯示，經(jīng)過正確處理的熱滅活血清，對大多數(shù)的細胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進，或完全沒有任何作用，甚至通常因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量，而造成細胞生長速率的降低。而經(jīng)過熱處理的血清，沉淀物的形成會顯著的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察，像是“小黑點”，常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環(huán)境中，又會使此沉淀物更增多，使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。因此我們建議您，若非必須，您可以不需要做熱處理這一步。如此一來，不但節(jié)省您寶貴的時間，更確保血清的質(zhì)量!
6、為什么儲存在冰箱中的胎牛血清會出現(xiàn)少量沉淀?
胎牛血清沒有預老化，儲存在2-8℃時，血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。這應(yīng)該不會影響血清的質(zhì)量。推薦在-20℃儲存胎牛血清，避免反復凍融。
7、如何避免沉淀物的產(chǎn)生?
我們建議您在使用血清的時候，注意下列的操作：
解凍血清時請按照所建議的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫)，若血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃)，實驗顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。解凍血清時請隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生。
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