人 免 疫 缺 陷 病 毒  1  型 & 2  型 雙 重 探 針 法 熒 光 定 量  RT- PCR  試 劑 盒
H u m a n   I m m u n o d e fi c i e n c y   V i r u s   I & II  D o u bl e  p r o b e RT - q P C R  K i t  

產(chǎn)品及特點(diǎn)
人類免疫缺陷病毒（HIV）是一種逆轉(zhuǎn)錄病毒，能導(dǎo)致獲得性免疫缺陷綜合征（AIDS）， 這是一種嚴(yán)重的、致死性的傳染病。 HIV 主要通過性接觸、血液傳播和母嬰傳播等方式傳 播，感染后會使機(jī)體免疫功能受損，最終并發(fā)各種機(jī)會性感染和腫瘤�？煞譃� HIV1 和 HIV2。本試劑盒可在一次反應(yīng)中快速檢測兩種病毒：HIV1 和 HIV2。根據(jù)探針法熒光定 量 RT-PCR 原理開發(fā)，它具有下列特點(diǎn)：
1.   即開即用，用戶只需要提供核酸（含 DNA 和RNA）模板。
2.   提供兩種病毒的陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。
3.   反應(yīng)快速，靈敏度高。
4.   對所有單個病原體的高靈敏度和強(qiáng)特異性。
5.   可用于高通量檢測。
6.   本試劑盒足夠做 25μL 體系的探針法熒光定量 RT-PCR 50 次，只能用于科研。
  
成分規(guī)格

產(chǎn)品組成	編號	規(guī)格
2 × OneStep Probe Mix	GZ021101a	650 μl
OneStep Probe Enzyme Mix	GZ021102b	55 μl
DEPC-H2O	GZ070401	1 ml
熒光模板稀釋液	GZ070407	1 ml
HIV1& HIV2 雙重 RT-qPCR 引物-探針混合液	GZ1588299yp	160μl
HIV1& HIV2 雙重 RT-qPCR 陽性對照 (1×10E8  拷貝/μL)	GZ1588299pc	60 μl

  
保存條件
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對照需要單獨(dú)放置，不要污染其他試 劑。

使用方法
一、核酸提取(樣本制備區(qū))
用自選方法提取純化樣品核酸，本試劑盒跟市場上大多數(shù)核酸提取試劑盒兼容。病 毒基因組 DNA/RNA 提取試劑盒（離心柱型）提取核酸。

二、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(樣本制備區(qū))
（由于陽性對照濃度高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，避免污染樣 品或本試劑盒的其他成分）。
1.    標(biāo)記 6 個離心管，分別為 7 ，6 ，5 ，4 ，3 ，2。
2.    用帶芯槍頭分別加入 45 μL  熒光模板稀釋液，（最好用帶芯槍頭，下同）。
3.    在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL  的陽性對照(試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘， 得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4.    換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL  的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震 蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5.    換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL  的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震 蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6.    重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。 若無需制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，將陽性對照稀釋到 1×10E5 拷貝/μL 即可。

三、試劑配制(試劑準(zhǔn)備區(qū))
若有 N 個待檢樣品，準(zhǔn)備 N+2 個 qPCR 管(N 個待檢樣品+1個陰性對照+6 個陽性對 照) ，向各 PCR 管中分別加入下列成分。

成分	N 個 待檢樣品管	qPCR    陰性對照	qPCR    陽性對照
2 × OneStep Probe Mix	各 12.5 μL	12.5 μL	12.5 μL
OneStep Probe Enzyme Mix	各 1 μL	1 μL	1 μL
HIV1& HIV2 雙重 RT-qPCR 引物-探針混合液	各 3 μL	3 μL	3 μL
DEPC-H2O	各 6.5 μL	6.5 μL	6.5 μL

轉(zhuǎn)移至樣本準(zhǔn)備區(qū)。

四、添加模板(模板添加區(qū))
向 qPCR 管中分別加入 2μl 模板，順序?yàn)殛幮詫φ眨―EPC-H2O）、待測樣品模板、HIV1& HIV2 雙重 RT-qPCR 陽性對照，離心 30 秒，立即進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)。