細(xì)胞消化的關(guān)鍵技術(shù)要點(diǎn)

瀏覽次數(shù)：495　發(fā)布日期：2024-5-13　來源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負(fù)

一，細(xì)胞潤洗次數(shù)

絕大部分細(xì)胞用胰酶潤洗一次即可

胰酶是一種蛋白酶，酶切位點(diǎn)是肽鏈的Lys或Arg兩個(gè)殘基的羧基端肽鏈，通過在特定位置上降解蛋白，使細(xì)胞膜上與培養(yǎng)皿壁結(jié)合處蛋白降解，從而使兩者分離。這時(shí)，細(xì)胞由于自身內(nèi)部細(xì)胞骨架的張力以及培養(yǎng)液表面張力可成為球形。

由于在細(xì)胞培養(yǎng)中，胰蛋白酶的作用是使細(xì)胞間的蛋白質(zhì)水解從而使細(xì)胞離散。胰酶作用時(shí)間過長、作用次數(shù)過多，都容易破壞細(xì)胞表面結(jié)構(gòu)。

在吸去培養(yǎng)基后，用37℃預(yù)熱過的PBS潤洗細(xì)胞表面1-2次，隨后加入適量胰酶，以能夠平鋪在器皿底部一層，略蓋過細(xì)胞為原則。可放入37℃培養(yǎng)箱中孵育1-2分鐘。

二，何時(shí)終止消化

貼壁細(xì)胞層呈流沙狀可移動(dòng)即可終止消化

有不少細(xì)胞培養(yǎng)人員，喜歡把全部細(xì)胞，消化成間隔分布很離散的單個(gè)圓形的細(xì)胞，但實(shí)際上，此時(shí)的細(xì)胞已經(jīng)處于“消化過度”的狀態(tài)了。

因此，肉眼觀察下，50%左右細(xì)胞呈現(xiàn)流沙狀，或鏡下觀察細(xì)胞質(zhì)回縮，細(xì)胞之間不再連接成片，即可加入胰酶2-3倍體積的含血清培養(yǎng)基，終止消化。

逐典TrypLUS消化液是一種胰蛋白酶類似物（Trypsin Like Enzyme），是一種通過生物工程制備的非動(dòng)物源性重組蛋白酶，與胰蛋白酶有相似的解離動(dòng)力學(xué)，穩(wěn)定性更高，純度更好，消化更溫和，細(xì)胞毒性更低。目前主要應(yīng)用于細(xì)胞培養(yǎng)中，可以在賴氨酸和精氨酸的C末端切割肽鍵，可以替代豬或牛胰蛋白酶（Trypsin）對(duì)貼壁細(xì)胞的消化解離。生物制藥中，GMP級(jí)別的TrypLUS能夠?yàn)橐呙缟a(chǎn)、病毒載體生產(chǎn)提供高質(zhì)量和高性價(jià)比的貼壁細(xì)胞消化解決方案。