全能核酸酶可以降解所有形式的DNA和RNA,將它們消化成3-8個(gè)堿基長度的5-單磷酸寡核苷酸,且不具有堿基識別特異性。在生物技術(shù)和生物制藥領(lǐng)域中扮演著重要的角色,尤其是在生物蛋白藥的生產(chǎn)過程中,科研中常用于在蛋白樣品制備和純化工藝的改善、提高蛋白產(chǎn)量等方面;隨著生物藥的快速發(fā)展和應(yīng)用,全能核酸酶廣泛應(yīng)用于去除疫苗樣品、細(xì)胞和基因治療病毒樣品及重組蛋白藥物中的核酸污染,降低核酸殘留毒性風(fēng)險(xiǎn),提高產(chǎn)品安全性。
在生物蛋白藥的生產(chǎn)過程中,全能核酸酶主要用于以下幾個(gè)方面:
1,基因克隆與表達(dá):
全能核酸酶被用于構(gòu)建基因克隆載體,如質(zhì)粒或病毒載體。這些載體用于將目標(biāo)基因引入宿主細(xì)胞,以實(shí)現(xiàn)生物蛋白的高效表達(dá)。通過切割和連接DNA片段,全能核酸酶幫助研究人員構(gòu)建包含目標(biāo)基因的表達(dá)系統(tǒng)。
2,基因組編輯:
隨著CRISPR-Cas9等技術(shù)的興起,全能核酸酶在基因組編輯中發(fā)揮了重要作用。這些酶可以精確地切割基因組中的特定序列,為研究人員提供修改基因、插入或刪除特定基因片段的工具。
通過基因組編輯,研究人員可以優(yōu)化生物蛋白的生產(chǎn)途徑,提高產(chǎn)量或改善其生物活性。
3,去除核酸雜質(zhì):
在生物蛋白的純化過程中,全能核酸酶可用于去除殘留的DNA和RNA雜質(zhì)。這些雜質(zhì)可能會(huì)干擾生物蛋白的純度和活性,因此需要在最終產(chǎn)品前去除。
全能核酸酶的選擇性切割作用使得它們成為純化過程中的有效工具,確保生物蛋白藥的純度和質(zhì)量。
4,轉(zhuǎn)錄后修飾:
對于某些生物蛋白藥,其活性可能依賴于特定的轉(zhuǎn)錄后修飾。全能核酸酶在RNA加工和修飾過程中可能起到關(guān)鍵作用,如參與mRNA的剪接、修飾和穩(wěn)定性調(diào)控。
5,安全性提升:
通過去除可能引發(fā)免疫反應(yīng)的核酸雜質(zhì),全能核酸酶有助于提升生物蛋白藥的安全性。
在生產(chǎn)過程中使用全能核酸酶可以確保最終產(chǎn)品的純凈度,降低患者使用時(shí)的風(fēng)險(xiǎn)。
總之,全能核酸酶在生物蛋白藥的生產(chǎn)過程中扮演著重要角色,從基因克隆、基因組編輯、去除核酸雜質(zhì)到轉(zhuǎn)錄后修飾等多個(gè)環(huán)節(jié)都發(fā)揮著關(guān)鍵作用。這些作用共同確保了生物蛋白藥的高效、安全生產(chǎn)。
逐典Pannarase全能核酸酶優(yōu)勢:
1.無動(dòng)物源性、無氨芐青霉素
2.杰出單位比酶活、更高效的核酸降解能力
3.先進(jìn)的生產(chǎn)工藝,非傳統(tǒng)His標(biāo)簽純化、排除引入金屬離子風(fēng)險(xiǎn)
4.嚴(yán)格的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn),內(nèi)毒水平低,確保單位酶活的準(zhǔn)確性以及批次間穩(wěn)定性
全能核酸酶應(yīng)用條件:
全能核酸酶的酶活會(huì)受到多種因素的影響(例如溫度、pH、離子強(qiáng)度等),故用量范圍也會(huì)從0.1 U/mL-250 U/mL不等。因此,不同的操作環(huán)境下酶的最佳濃度不同,需要通過實(shí)驗(yàn)設(shè)置梯度進(jìn)行最佳條件的摸索。
應(yīng)用實(shí)例:
1.樣品:狂犬病毒濃縮液
處理?xiàng)l件:核酸酶濃度50~90U/ml ,
37 ℃處理 2 h,轉(zhuǎn)入18 ~ 26 ℃處理 6h
2.樣品:狂犬病病毒濃縮液
處理?xiàng)l件:25、50和100 U/ml,37℃
3.樣品:流感病毒濃縮液
處理?xiàng)l件:10 U/mL,37℃