物源性胰蛋白酶，如從牛、豬的胰臟中提取的胰蛋白酶，在細(xì)胞培養(yǎng)中起著關(guān)鍵作用。它主要通過降解細(xì)胞外基質(zhì)以及斷開細(xì)胞間連接，幫助實現(xiàn)細(xì)胞的分離。這對于各種生物技術(shù)實驗，如細(xì)胞流式檢測、外泌體提取、細(xì)胞轉(zhuǎn)移和透析等都具有重要意義。然而，使用動物源性胰蛋白酶也存在一些潛在的問題。
 

一,安全性

可能的病毒污染：目前，使用豬胰蛋白酶的疫苗生產(chǎn)企業(yè)要按照2010版藥典規(guī)定檢測可能的病毒含量，如豬細(xì)小病毒。

可能細(xì)菌、真菌、支原體污染：將影響細(xì)胞的生長和產(chǎn)品質(zhì)量。

重組胰蛋白酶是基因工程重組生產(chǎn)，無外源性的病毒污染，生產(chǎn)過程不使用任何動物源原料。

二,純度

雜質(zhì)：因為歷史的原因，用于組織培養(yǎng)的胰蛋白酶活性定為1:250，其實，1:250的胰蛋白酶中90%以上為雜質(zhì)。

雜質(zhì)的成分主要為來源于胰腺的脂類、蛋白和核酸等，在胰蛋白酶處理細(xì)胞的過程中，可能會透過細(xì)胞膜，可能對細(xì)胞的生長形成影響，特別是在科研中，用細(xì)胞來鑒定一些活性物質(zhì)的作用時，可能會影響真實效果的檢測。

重組胰蛋白酶純度高，比活高；宿主蛋白殘留小于生物制品限度要求。

三,消化效果與活性相關(guān)

活性：雖然用于組織培養(yǎng)的胰蛋白酶活性定為1:250，實際上，其活性卻不固定，有的可能不到1:250，有的卻可以高達(dá)1:1000--1:2000。因此，如果都用常規(guī)的配制方法如：0.25%來配制的話，將會使胰蛋白酶消化液的活性相差5倍甚至10倍。

弊端：胰蛋白酶的活性直接影響細(xì)胞消化結(jié)果和消化后細(xì)胞的生長。

活性過低：細(xì)胞消化不好，細(xì)胞消化所需時間長；

活性過高：細(xì)胞消化太快（比如：不到30s），易于消化過度，其危害是：輕則影響細(xì)胞生長，重則細(xì)胞死亡。消化后轉(zhuǎn)接細(xì)胞密度減小，規(guī)定時間內(nèi)生長不起來。

重組胰蛋白酶可按照活性單位投料，完全避免使用過程中過多或者過少投料。

逐典重組胰蛋白酶

Trypelectase 重組胰蛋白酶是逐典生物專門為疫苗、病毒載體生產(chǎn)設(shè)計，具有高效、非動物源和高質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的特點。該胰蛋白酶氨基酸序列與豬胰腺來源的胰蛋白酶一致，由大腸桿菌(E.col) 重組表達(dá)生產(chǎn)。在GMP級別環(huán)境中生產(chǎn)的重組胰蛋白酶能高效消化貼壁細(xì)胞且不造成傷害，產(chǎn)品質(zhì)量滿足藥典要求。

逐典重組胰蛋白酶特點

1.GMP級生產(chǎn)環(huán)境、符合藥典標(biāo)準(zhǔn)

2.重組生產(chǎn)、不含雜酶

3.批量生產(chǎn)、質(zhì)量穩(wěn)定

4.高純度、高比活

5.非動物源原料

逐典重組胰蛋白酶應(yīng)用場景

組織塊的消化解離和原代細(xì)胞的獲取、貼壁細(xì)胞的傳代消化和收獲、微載體方法培養(yǎng)的細(xì)胞消化和收獲。

實驗數(shù)據(jù)

CT26.WT 和 HEK293FT 細(xì)胞消化實驗

CT26WT和HEK293FT在經(jīng)Trypelectase重組胰酶消化3min后解離效果較好，細(xì)胞活率顯示對細(xì)胞傷害較小，不會影響細(xì)胞傳代。

 

Trypelectase重組豬胰酶對細(xì)胞消化過程及傳代24h細(xì)胞貼壁圖

逐典重組胰蛋白酶常見問題

Q：逐典重組胰蛋白酶配置是否需要過濾?

A：需要使用0.22μm濾膜除菌過濾，這個在母液配置和工作液（即稀釋后）的配置中都是需要的。

Q：逐典重組胰酶產(chǎn)品是否是無菌產(chǎn)品？

A：不是無菌產(chǎn)品，產(chǎn)品COA中是微生物限度標(biāo)準(zhǔn)為100CFU，所以在配置使用前需要進(jìn)行無菌過濾。

Q：逐典重組胰蛋白酶的配置有哪些環(huán)節(jié)？分幾步？

A：重組胰酶從干粉到能直接使用的工作液需要兩大環(huán)節(jié)。第一步：需要配置成低PH的母液，除菌過濾；第二步：再進(jìn)行中性緩沖液稀釋，過濾除菌后就能直接使用了。

Q：逐典重組胰酶的主要優(yōu)點是那些？

A：非動物來源、GMP環(huán)境生產(chǎn)、高酶活、高穩(wěn)定性。

Q：逐典重組胰酶的建議使用濃度是多少？

A：配置母液的濃度是10 mg/ml，配置工作液濃度是0.5 mg/ml。

Q：逐典重組胰酶產(chǎn)品如何保存？干粉？母液？工作液？

A：一般來說，我們的干粉產(chǎn)品 -20℃保存 2年沒有問題， 配成母液-20℃保存 1年沒有問題，工作液的話-20℃保存 1-3個月沒有問題，臨時用放在4℃可保存一周內(nèi)，但還是建議客戶現(xiàn)用現(xiàn)配。

Q：消化細(xì)胞的胰酶是不是濃度越高越好？

A：不是的，一般來說消化細(xì)胞會有一個最佳胰酶濃度，達(dá)到最適濃度后濃度升高會傷害細(xì)胞。

Q: 細(xì)胞消化時間長是不是意味著胰酶產(chǎn)品性能不行？

A: 一般的細(xì)胞消化時間3-5min都是很正常的，難消化的細(xì)胞10-15min也是存在的。 細(xì)胞消化時間長短不能完全決定產(chǎn)品性能，產(chǎn)品的比活、活性、級別、生產(chǎn)技術(shù)、以及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等因素都是評判產(chǎn)品性能的條件。

Q: 如何控制胰酶消化時間？

A: 不同細(xì)胞對消化液的敏感性不同，胰酶消化的時間也會有差異。胰酶消化時間與胰酶的濃度，是否含EDTA，胰酶的儲存時間，胰酶的儲存溫度，是否反復(fù)凍融，消化加入的胰酶體積，消化溫度及細(xì)胞的密度有關(guān)。