ELISA試劑盒試驗中的溫育全面解讀
在ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反響，即加標本和加酶結(jié)合物后�？乖贵w反響的完結(jié)需求有必定的溫度和時刻，這一保溫進程稱為溫育(incubation)，有人稱之為孵育，在ELISA中似不恰當。
一、溫育時刻:
ELISA屬固相免疫測定，抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)作。以抗體包被的夾心法為例，參加板孔中的標本，其間的抗原并不是都有平等的和固相抗結(jié)合的時機，只需zui靠近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個逐漸平衡的進程，因而需經(jīng)擴散才干到達反響的結(jié)尾。在這以后參加的酶符號抗體與固相抗原的結(jié)合也相同如此。這就是為什么ELISA反響總是需求必定時刻的溫育。
二、ELISA試劑盒溫育溫度：
溫育常選用的溫度有43℃、37℃、室溫文4℃(冰箱溫度)等。37℃是試驗室中常用的保溫溫度，也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的適宜溫度。在樹立ELISA辦法作反響動力學(xué)研討時，試驗標明，兩次抗原抗體反響一般在37℃經(jīng)1-2小時，產(chǎn)物的生成可達頂峰。為加速反響，可進步反響的溫度，有些試驗在43℃進行，但不宜選用更高的溫度。抗原抗體反響4℃更為完全，在放射免疫測定中多使反響在冰箱中過夜，以構(gòu)成zui多的沉積。但因所需時刻太長，在ELISA中一般不予選用。
三、溫育保溫：
保溫的方法除有的ELISA儀qi附有特制的電熱塊外，一般均選用水浴，可將ELISA板置于水浴箱中，ELISA板底應(yīng)貼著水面，使溫度敏捷平衡。為防止蒸騰，板上應(yīng)加蓋，也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔，此刻可讓反響板漂浮在水面上。若用保溫箱，ELISA板應(yīng)放在濕盒內(nèi)，濕盒要選用傳熱性杰出的資料如金屬等，在盒底墊濕的紗布，zui終將ELISA板放在濕紗布上。濕盒應(yīng)先放在保溫箱中預(yù)溫至規(guī)則的溫度，特別是在氣溫較低的時分更應(yīng)如此。無論是水浴仍是濕盒溫育，反響板均不宜疊放，以確保各板的溫度都能敏捷平衡。室溫溫育的反響，操作時的室溫應(yīng)嚴厲約束在規(guī)則的范圍內(nèi)，規(guī)范室溫溫度是指20-25℃，但具體操作時可根據(jù)說明書的要求操控溫育。室溫溫育時，ELISA板只需平置于操作臺上即可。
實際測定操作注意事項：
1、不同的溫育環(huán)境對檢測結(jié)果有影響，操作中應(yīng)嚴格按照說明書控制溫育時間及溫度，并注意封閉避免邊緣效應(yīng)。
2、為確保各板溫度都能迅速達到平衡，不可將反應(yīng)板疊加放置，設(shè)定的溫度及時間嚴格按照說明書進行，一般加入待測標本后使其與固相抗原(抗體)置于37℃環(huán)境下溫育。因為很多恒溫箱的構(gòu)造，溫度及檢測的溫度并非酶標板溫育溫度，所以使用恒溫箱溫育時建議將溫度計置于酶標板旁，保證酶標板旁溫度為37℃。
3、干育和水溫的影響差異較為明顯，建議使用水溫，注意將固相板放入水中，防止受熱不均勻。
4、試劑盒一般設(shè)定的反響溫度為 37℃，在這個溫度下放置 30 分鐘，蒸騰的水分會許多，對于全部反響體系來講，各種反響物的濃度會不斷添加，這么必會致使反響畢竟的值添加，溫育時貼封片或加蓋，避免標本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁。
5、試劑盒斷定的一定溫度下的反響時間并不是反響的完畢，添加反響的溫度，會加速反響，一樣添加時間會延伸反響，這么得到的反響程度會比試劑盒斷定的反響程度多，也會引起陰性高值或假陽性。
6、實驗操作的嚴謹性與實驗操作規(guī)范密不可分，未使用的試劑應(yīng)儲存于2-8℃，使用時應(yīng)回溫到室溫（20-25℃）。切忌不同批次的試劑混合使用，要經(jīng)常檢查酶標儀和微量移液器的精度和準備度…… ELISA看起來很簡單，但是在實際操作過程中，絕不能掉以輕心，除了嚴謹規(guī)范的實驗操作，高品質(zhì)的試劑盒與專業(yè)的技術(shù)團隊也是獲得準確結(jié)果的保證！
一、溫育時刻:
ELISA屬固相免疫測定，抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)作。以抗體包被的夾心法為例，參加板孔中的標本，其間的抗原并不是都有平等的和固相抗結(jié)合的時機，只需zui靠近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個逐漸平衡的進程，因而需經(jīng)擴散才干到達反響的結(jié)尾。在這以后參加的酶符號抗體與固相抗原的結(jié)合也相同如此。這就是為什么ELISA反響總是需求必定時刻的溫育。
二、ELISA試劑盒溫育溫度：
溫育常選用的溫度有43℃、37℃、室溫文4℃(冰箱溫度)等。37℃是試驗室中常用的保溫溫度，也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的適宜溫度。在樹立ELISA辦法作反響動力學(xué)研討時，試驗標明，兩次抗原抗體反響一般在37℃經(jīng)1-2小時，產(chǎn)物的生成可達頂峰。為加速反響，可進步反響的溫度，有些試驗在43℃進行，但不宜選用更高的溫度。抗原抗體反響4℃更為完全，在放射免疫測定中多使反響在冰箱中過夜，以構(gòu)成zui多的沉積。但因所需時刻太長，在ELISA中一般不予選用。
三、溫育保溫：
保溫的方法除有的ELISA儀qi附有特制的電熱塊外，一般均選用水浴，可將ELISA板置于水浴箱中，ELISA板底應(yīng)貼著水面，使溫度敏捷平衡。為防止蒸騰，板上應(yīng)加蓋，也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔，此刻可讓反響板漂浮在水面上。若用保溫箱，ELISA板應(yīng)放在濕盒內(nèi)，濕盒要選用傳熱性杰出的資料如金屬等，在盒底墊濕的紗布，zui終將ELISA板放在濕紗布上。濕盒應(yīng)先放在保溫箱中預(yù)溫至規(guī)則的溫度，特別是在氣溫較低的時分更應(yīng)如此。無論是水浴仍是濕盒溫育，反響板均不宜疊放，以確保各板的溫度都能敏捷平衡。室溫溫育的反響，操作時的室溫應(yīng)嚴厲約束在規(guī)則的范圍內(nèi)，規(guī)范室溫溫度是指20-25℃，但具體操作時可根據(jù)說明書的要求操控溫育。室溫溫育時，ELISA板只需平置于操作臺上即可。
實際測定操作注意事項：
1、不同的溫育環(huán)境對檢測結(jié)果有影響，操作中應(yīng)嚴格按照說明書控制溫育時間及溫度，并注意封閉避免邊緣效應(yīng)。
2、為確保各板溫度都能迅速達到平衡，不可將反應(yīng)板疊加放置，設(shè)定的溫度及時間嚴格按照說明書進行，一般加入待測標本后使其與固相抗原(抗體)置于37℃環(huán)境下溫育。因為很多恒溫箱的構(gòu)造，溫度及檢測的溫度并非酶標板溫育溫度，所以使用恒溫箱溫育時建議將溫度計置于酶標板旁，保證酶標板旁溫度為37℃。
3、干育和水溫的影響差異較為明顯，建議使用水溫，注意將固相板放入水中，防止受熱不均勻。
4、試劑盒一般設(shè)定的反響溫度為 37℃，在這個溫度下放置 30 分鐘，蒸騰的水分會許多，對于全部反響體系來講，各種反響物的濃度會不斷添加，這么必會致使反響畢竟的值添加，溫育時貼封片或加蓋，避免標本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁。
5、試劑盒斷定的一定溫度下的反響時間并不是反響的完畢，添加反響的溫度，會加速反響，一樣添加時間會延伸反響，這么得到的反響程度會比試劑盒斷定的反響程度多，也會引起陰性高值或假陽性。
6、實驗操作的嚴謹性與實驗操作規(guī)范密不可分，未使用的試劑應(yīng)儲存于2-8℃，使用時應(yīng)回溫到室溫（20-25℃）。切忌不同批次的試劑混合使用，要經(jīng)常檢查酶標儀和微量移液器的精度和準備度…… ELISA看起來很簡單，但是在實際操作過程中，絕不能掉以輕心，除了嚴謹規(guī)范的實驗操作，高品質(zhì)的試劑盒與專業(yè)的技術(shù)團隊也是獲得準確結(jié)果的保證！
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