CCK8試劑檢測(cè)耐藥細(xì)胞株P(guān)C9R對(duì)吉非替尼耐藥作用的方法及步驟
瀏覽次數(shù):831 發(fā)布日期:2024-4-22
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CCK8 檢測(cè)耐藥細(xì)胞株耐藥株 PC9R 吉非替尼藥物的耐藥作用
細(xì)胞: PC9R 、PC9
藥物:吉非替尼
儀器與試劑: CCK8 試劑 日本同仁;
分光光度計(jì) TECAN
實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
一:細(xì)胞培養(yǎng)
PC9R 和 PC9 均采用含 10%胎牛血清,1%雙抗(青鏈霉素混合液) 的 DMEM 培養(yǎng)基,置于 37℃, 5% CO2 的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。
二、 吉非替尼藥物貯藏液的配置
向已稱好樣本重量的 EP 管中直接加入 DMSO 稀釋成 50mmol/L 的濃度,使 用前再稀釋弄所需的使用濃度。
三、 CCK8 試驗(yàn)
1. 在 96 孔板中配制 100 ul 的細(xì)胞懸液(2000–3000 cells/孔)。將培養(yǎng)板在培養(yǎng) 箱預(yù)培養(yǎng) 24 小時(shí) ( 在 37℃, 5% CO2 的條件下 )。
2. 向培養(yǎng)板加入 10 ul 八個(gè)濃度 (0.390625uM, 0.78125uM, 1.565uM, 3.125 uM ,6.25 uM, 12.5 uM, 25uM, 50 uM) 的待測(cè)藥物。
3. 將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育 24 小時(shí)。
4. 向每孔加入 10 ul CCK-8 溶液 (注意不要在孔中生成氣泡,它們會(huì)影響 O. D 值 的讀數(shù),斜著培養(yǎng)板壁加, 不要插到培養(yǎng)基液面下加) 。加入后輕輕振搖培養(yǎng)板。
5. 將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育 1-4 小時(shí)。
6. 用酶標(biāo)儀測(cè)定在 450 nm 處的吸光度。
上海雅吉生物科技有限公司
內(nèi)部資料
四、 IC50 結(jié)果計(jì)算
1、儀器導(dǎo)出原始數(shù)據(jù)
吸光度檢測(cè) |
通道 |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
9 |
10 |
11 |
12 |
檢測(cè)波長(zhǎng) |
A |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
450 nm |
B |
|
1.001 |
0.881 |
0.915 |
0.686 |
1.951 |
1.422 |
1.315 |
1.314 |
1.209 |
2.044 |
|
|
C |
|
1.226 |
1.254 |
1.166 |
0.581 |
2.273 |
1.503 |
1.478 |
1.508 |
1.112 |
1.973 |
|
檢測(cè)日期 |
D |
|
1.57 |
1.544 |
1.543 |
0.522 |
1.929 |
1.661 |
1.803 |
1.743 |
1.143 |
2.145 |
|
2019/8/1 |
E |
|
1.691 |
1.787 |
1.717 |
0.487 |
0.239 |
1.943 |
1.858 |
1.796 |
0.93 |
0.232 |
|
|
F |
|
1.811 |
1.769 |
1.838 |
0.399 |
0.234 |
1.941 |
1.859 |
1.896 |
0.857 |
0.244 |
|
檢測(cè)時(shí)間 |
G |
|
2.094 |
1.838 |
1.905 |
0.525 |
0.25 |
2.077 |
1.903 |
1.963 |
0.851 |
0.232 |
|
16:07:31 |
H |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
加樣備注:
|
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
9 |
10 |
11 |
12 |
A |
PCR |
|
|
|
|
|
PC9R |
|
|
|
|
|
B |
|
12.5uM |
12.5uM |
12.5uM |
25uM |
0uM |
12.5uM |
12.5uM |
12.5uM |
25uM |
0uM |
|
C |
|
6.25uM |
6.25uM |
6.25uM |
25uM |
0uM |
6.25uM |
6.25uM |
6.25uM |
25uM |
0uM |
|
D |
|
3.125uM |
3.125uM |
3.125uM |
25uM |
0uM |
3.125uM |
3.125uM |
3.125uM |
25uM |
0uM |
|
E |
|
1.5625uM |
1.5625uM |
1.5625uM |
50uM |
空白 |
1.5625uM |
1.5625uM |
1.5625uM |
50uM |
空白 |
|
F |
|
0.78125uM |
0.78125uM |
0.78125uM |
50uM |
空白 |
0.78125uM |
0.78125uM |
0.78125uM |
50uM |
空白 |
|
G |
|
0.390625uM |
0.390625uM |
0.390625uM |
50uM |
空白 |
0.390625uM |
0.390625uM |
0.390625uM |
50uM |
空白 |
|
H |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
2、計(jì)算結(jié)果
親本株 |
濃度(uM) |
50 |
25 |
12.5 |
6.25 |
3.125 |
1.5625 |
0.78125 |
0.390625 |
|
抑制百分比
(%) |
87.32965 |
80.36832 |
61.80479 |
46.16943 |
27.55064 |
17.64273 |
13.53591 |
5.819521 |
耐藥株 |
濃度(uM) |
50 |
25 |
12.5 |
6.25 |
3.125 |
1.5625 |
0.78125 |
0.390625 |
|
抑制百分比
(%) |
64.61313 |
49.46828 |
38.70554 |
30.67473 |
17.51008 |
10.35937 |
8.544188 |
4.015402 |