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CCK8試劑檢測(cè)耐藥細(xì)胞株P(guān)C9R對(duì)吉非替尼耐藥作用的方法及步驟

瀏覽次數(shù):831 發(fā)布日期:2024-4-22  來(lái)源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
CCK8 檢測(cè)耐藥細(xì)胞株耐藥株 PC9R 吉非替尼藥物的耐藥作用
 
細(xì)胞: PC9R 、PC9
藥物:吉非替尼
儀器與試劑: CCK8 試劑 日本同仁;
分光光度計(jì) TECAN
 
實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
一:細(xì)胞培養(yǎng)

PC9R 和 PC9 均采用含 10%胎牛血清,1%雙抗(青鏈霉素混合液) 的 DMEM 培養(yǎng)基,置于 37℃, 5% CO2 的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。
 
二、 吉非替尼藥物貯藏液的配置
向已稱好樣本重量的 EP 管中直接加入 DMSO 稀釋成 50mmol/L 的濃度,使 用前再稀釋弄所需的使用濃度。
 
三、 CCK8 試驗(yàn)
1.  在 96  孔板中配制 100 ul 的細(xì)胞懸液(2000–3000 cells/孔)。將培養(yǎng)板在培養(yǎng) 箱預(yù)培養(yǎng) 24 小時(shí) (  在 37℃,  5% CO2 的條件下 )。
2.   向培養(yǎng)板加入 10  ul  八個(gè)濃度 (0.390625uM,  0.78125uM,  1.565uM,  3.125 uM ,6.25 uM, 12.5 uM, 25uM, 50 uM) 的待測(cè)藥物。
3.  將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育 24 小時(shí)。
4.  向每孔加入 10 ul CCK-8  溶液 (注意不要在孔中生成氣泡,它們會(huì)影響 O. D 值 的讀數(shù),斜著培養(yǎng)板壁加, 不要插到培養(yǎng)基液面下加)  。加入后輕輕振搖培養(yǎng)板。
5.  將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育 1-4 小時(shí)。
6.  用酶標(biāo)儀測(cè)定在 450 nm 處的吸光度。

上海雅吉生物科技有限公司
內(nèi)部資料
 
四、 IC50 結(jié)果計(jì)算
1、儀器導(dǎo)出原始數(shù)據(jù)
 
吸光度檢測(cè) 通道 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
檢測(cè)波長(zhǎng) A                        
450 nm B   1.001 0.881 0.915 0.686 1.951 1.422 1.315 1.314 1.209 2.044  
  C   1.226 1.254 1.166 0.581 2.273 1.503 1.478 1.508 1.112 1.973  
檢測(cè)日期 D   1.57 1.544 1.543 0.522 1.929 1.661 1.803 1.743 1.143 2.145  
2019/8/1 E   1.691 1.787 1.717 0.487 0.239 1.943 1.858 1.796 0.93 0.232  
  F   1.811 1.769 1.838 0.399 0.234 1.941 1.859 1.896 0.857 0.244  
檢測(cè)時(shí)間 G   2.094 1.838 1.905 0.525 0.25 2.077 1.903 1.963 0.851 0.232  
16:07:31 H                        

加樣備注:
 
  1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
A PCR           PC9R          
B   12.5uM 12.5uM 12.5uM 25uM 0uM 12.5uM 12.5uM 12.5uM 25uM 0uM  
C   6.25uM 6.25uM 6.25uM 25uM 0uM 6.25uM 6.25uM 6.25uM 25uM 0uM  
D   3.125uM 3.125uM 3.125uM 25uM 0uM 3.125uM 3.125uM 3.125uM 25uM 0uM  
E   1.5625uM 1.5625uM 1.5625uM 50uM 空白 1.5625uM 1.5625uM 1.5625uM 50uM 空白  
F   0.78125uM 0.78125uM 0.78125uM 50uM 空白 0.78125uM 0.78125uM 0.78125uM 50uM 空白  
G   0.390625uM 0.390625uM 0.390625uM 50uM 空白 0.390625uM 0.390625uM 0.390625uM 50uM 空白  
H                        
 
2、計(jì)算結(jié)果
 
親本株 濃度(uM) 50 25 12.5 6.25 3.125 1.5625 0.78125 0.390625
  抑制百分比
(%)
87.32965 80.36832 61.80479 46.16943 27.55064 17.64273 13.53591 5.819521
耐藥株 濃度(uM) 50 25 12.5 6.25 3.125 1.5625 0.78125 0.390625
  抑制百分比
(%)
64.61313 49.46828 38.70554 30.67473 17.51008 10.35937 8.544188 4.015402
 
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