細(xì)胞是生物體結(jié)構(gòu)和功能的基本單位，是生命活動最小的組織單位。細(xì)胞培養(yǎng)則是生命科學(xué)研究領(lǐng)域“王冠”上的“明珠”。在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，細(xì)胞消化是一項重要的步驟，通過細(xì)胞消化可使培養(yǎng)過程中產(chǎn)生的粘連蛋白被分解掉，讓細(xì)胞分散，而且有利于細(xì)胞進(jìn)行營養(yǎng)交換，從而維持細(xì)胞的正常生命周期和功能。
 

細(xì)胞消化液可以通過不同的方法制備，常見的方法包括酶消化、堿性溶液消化等。細(xì)胞培養(yǎng)中使用的消化液通常根據(jù)具體培養(yǎng)細(xì)胞的要求進(jìn)行配制�？偟膩碚f，細(xì)胞消化液在維持細(xì)胞功能、代謝物質(zhì)和清除廢物等方面起著至關(guān)重要的作用。它使得細(xì)胞能夠高效地進(jìn)行消化、吸收和代謝，從而維持細(xì)胞的正常生命周期和功能。

最常用的細(xì)胞消化液之一是胰蛋白酶，在進(jìn)行原代培養(yǎng)時可將組織塊消化解離形成細(xì)胞懸液，傳代培養(yǎng)時也可將貼壁細(xì)胞從瓶壁上消化下來。

逐典重組胰蛋白酶

Trypelectase 重組胰蛋白酶是逐典生物專門為疫苗、病毒載體生產(chǎn)設(shè)計，具有高效、非動物源和高質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的特點。該胰蛋白酶氨基酸序列與豬胰腺來源的胰蛋白酶一致，由大腸桿菌(E.col) 重組表達(dá)生產(chǎn)。在GMP級別環(huán)境中生產(chǎn)的重組胰蛋白酶能高效消化貼壁細(xì)胞且不造成傷害，產(chǎn)品質(zhì)量滿足藥典要求。

逐典重組胰蛋白酶特點

1.GMP級生產(chǎn)環(huán)境、符合藥典標(biāo)準(zhǔn)

2.重組生產(chǎn)、不含雜酶

3.批量生產(chǎn)、質(zhì)量穩(wěn)定

4.高純度、高比活

5.非動物源原料

逐典重組胰蛋白酶應(yīng)用場景

組織塊的消化解離和原代細(xì)胞的獲取、貼壁細(xì)胞的傳代消化和收獲、微載體方法培養(yǎng)的細(xì)胞消化和收獲。

實驗數(shù)據(jù)

CT26.WT 和 HEK293FT 細(xì)胞消化實驗

CT26WT和HEK293FT在經(jīng)Trypelectase重組胰酶消化3min后解離效果較好，細(xì)胞活率顯示對細(xì)胞傷害較小，不會影響細(xì)胞傳代。

 

Trypelectase重組豬胰酶對細(xì)胞消化過程及傳代24h細(xì)胞貼壁圖

逐典重組胰蛋白酶常見問題

Q：逐典重組胰蛋白酶配置是否需要過濾?

A：需要使用0.22μm濾膜除菌過濾，這個在母液配置和工作液（即稀釋后）的配置中都是需要的。

Q：逐典重組胰酶產(chǎn)品是否是無菌產(chǎn)品？

A：不是無菌產(chǎn)品，產(chǎn)品COA中是微生物限度標(biāo)準(zhǔn)為100CFU，所以在配置使用前需要進(jìn)行無菌過濾。

Q：逐典重組胰蛋白酶的配置有哪些環(huán)節(jié)？分幾步？

A：重組胰酶從干粉到能直接使用的工作液需要兩大環(huán)節(jié)。第一步：需要配置成低PH的母液，除菌過濾；第二步：再進(jìn)行中性緩沖液稀釋，過濾除菌后就能直接使用了。

Q：逐典重組胰酶的主要優(yōu)點是那些？

A：非動物來源、GMP環(huán)境生產(chǎn)、高酶活、高穩(wěn)定性。

Q：逐典重組胰酶的建議使用濃度是多少？

A：配置母液的濃度是10 mg/ml，配置工作液濃度是0.5 mg/ml。

Q：逐典重組胰酶產(chǎn)品如何保存？干粉？母液？工作液？

A：一般來說，我們的干粉產(chǎn)品 -20℃保存 2年沒有問題， 配成母液-20℃保存 1年沒有問題，工作液的話-20℃保存 1-3個月沒有問題，臨時用放在4℃可保存一周內(nèi)，但還是建議客戶現(xiàn)用現(xiàn)配。

Q：消化細(xì)胞的胰酶是不是濃度越高越好？

A：不是的，一般來說消化細(xì)胞會有一個最佳胰酶濃度，達(dá)到最適濃度后濃度升高會傷害細(xì)胞。

Q: 細(xì)胞消化時間長是不是意味著胰酶產(chǎn)品性能不行？

A: 一般的細(xì)胞消化時間3-5min都是很正常的，難消化的細(xì)胞10-15min也是存在的。 細(xì)胞消化時間長短不能完全決定產(chǎn)品性能，產(chǎn)品的比活、活性、級別、生產(chǎn)技術(shù)、以及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等因素都是評判產(chǎn)品性能的條件。

Q: 如何控制胰酶消化時間？

A: 不同細(xì)胞對消化液的敏感性不同，胰酶消化的時間也會有差異。胰酶消化時間與胰酶的濃度，是否含EDTA，胰酶的儲存時間，胰酶的儲存溫度，是否反復(fù)凍融，消化加入的胰酶體積，消化溫度及細(xì)胞的密度有關(guān)。