全能核酸酶多樣化應用場景介紹
一，廣闊的應用前景
1,降低細胞/細菌裂解時核酸釋放產(chǎn)生的黏度，并且適用于任何裂解方式。
2,在大規(guī)模的層析純化時，避免由于大量的核酸吸附在層析介質(zhì)上降低蛋白質(zhì)的有效載量從而降低純化得率。
3,在 ELISA、二維電泳和免疫印跡分析中，提高分辨率和回收率，這對于準確、高效地分析生物樣品至關重要。
4,消除重組蛋白、疫苗等生物制品的外源性核酸殘留，這是確保產(chǎn)品安全、有效的關鍵步驟。
二，全能核酸酶的應用
1,E.coli表達的重組蛋白純化
對于某些大腸桿菌表達的蛋白，很容易形成包涵體，在純化的過程中常常與宿主DNA纏繞在一起，破碎的菌體往往非常粘稠，大大降低了蛋白的純化效率。通過瓊脂糖凝膠電泳可以發(fā)現(xiàn)，宿主DNA確實會與蛋白結合，并在一定程度上限制了全能核酸酶的消化。通過延長全能核酸酶的處理時間或增加用量，可以有效去除結合的宿主DNA。
圖1. 1-5：經(jīng)過全能核酸酶不同時長處理的樣品，處理時間越長，效果越好
2,Western-blot實驗中的應用
W-B實驗常常用于研究蛋白質(zhì)間的相互作用，當我們在研究細胞中蛋白互作網(wǎng)絡時，提取的蛋白樣本中往往含有大量核酸，使得研究者難以分辨這種互作關系是蛋白-蛋白之間形成的，還是由DNA的橋接間接導致的。同時，核酸的存在也會導致實驗結果條帶不清晰、背景較雜。
用全能核酸酶預處理樣品，一方面可以避免這種DNA的橋接作用的影響，另一方面可以減少背景雜質(zhì)。
圖2. +：用全能核酸酶預處理樣品，—：未使用全能核酸酶處理的樣本
3,CHIP-seq實驗中的應用
衰老的發(fā)生與大量染色質(zhì)變化同時發(fā)生，這很有可能就是衰老的原因。目前，研究這類變化的首選方法是染色質(zhì)免疫沉淀，然后進行測序 (ChIP-Seq)。早期常用的方法是甲醛處理細胞，再通過超聲處理產(chǎn)生150到300 bp之間的染色質(zhì)片段來完成的。但是通過這種方式得到的DNA量太少，不足以用于測序。使用全能核酸酶消化DNA和RNA，可以輕松地從衰老細胞中分離染色質(zhì)。全能核酸酶不具有蛋白酶活性，可以輕易獲得足夠的DNA并進行測序。
圖3. 20 分鐘內(nèi)RKO細胞中全能核酸酶對染色質(zhì)消化的比較
4,PBMC細胞結團
近年來，冷凍保存的外周血單核細胞 (PBMC) 在免疫分析中的應用急劇增加。冷凍保存的PBMC在終點頻率較低的臨床試驗中特別有用，因為可以在研究結束后進行免疫分析。此外，使用冷凍保存的PBMC可以在一個實驗室中進行所有檢測，消除了實驗室間變異性，使用冷凍PBMC還可以消除批間變異的影響。
除了解決儲存條件的問題以外，PBMC細胞最大的特性是在復蘇后極易結團，容易導致細胞質(zhì)量低，檢測結果不可信。在細胞復蘇的時候?qū)⑷芎怂崦讣尤氲脚囵B(yǎng)基中和細胞共培養(yǎng)，可以有效防止細胞結團。
圖4.未經(jīng)全能核酸酶處理的過夜儲存血液的斑點計數(shù)結果顯示，四個供體有三個顯著減少，用全能核酸酶處理的過夜血液PBMC的SFC結果更接近于從新鮮血液中分離的細胞獲得的結果
三，逐典Pannarase全能核酸酶優(yōu)勢：
1.無動物源性、無氨芐青霉素
2.杰出單位比酶活、更高效的核酸降解能力
3.先進的生產(chǎn)工藝，非傳統(tǒng)His標簽純化、排除引入金屬離子風險
4.嚴格的質(zhì)控標準，內(nèi)毒水平低，確保單位酶活的準確性以及批次間穩(wěn)定性
1，全能核酸酶應用條件：
全能核酸酶的酶活會受到多種因素的影響（例如溫度、pH、離子強度等），故用量范圍也會從0.1 U/mL-250 U/mL不等。因此，不同的操作環(huán)境下酶的最佳濃度不同，需要通過實驗設置梯度進行最佳條件的摸索。
2，應用實例：
1.樣品：狂犬病毒濃縮液
處理條件:核酸酶濃度50~90U/ml ,
37 ℃處理 2 h,轉入18 ~ 26 ℃處理 6h
表 1.不同酶濃度對狂犬病病毒收獲液中 Vero 細胞 DNA 的去除效果【11
2.樣品：狂犬病病毒濃縮液
處理條件：25、50和100 U/ml，37℃
表 2.不同濃度核酸酶作用不同時間去除 Vero 細胞 DNA 效果的比較【2]
3.樣品：流感病毒濃縮液
處理條件：10 U/mL，37℃
表 3.核酸酶處理 300k 超濾濃縮效果(x± s，n=3)【3]
