外泌體的組成、來源、提取及熒光標(biāo)記方法
瀏覽次數(shù):878 發(fā)布日期:2024-4-8
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外泌體——包含了復(fù)雜RNA和蛋白質(zhì)的小泡膜(直徑在40nm-100nm)
外泌體的發(fā)現(xiàn)及命名:1983年在綿羊網(wǎng)織紅細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)外泌體,1987年被命名為”exosome”。
外泌體的組成:外泌體主要含有融合蛋白和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白、熱休克蛋白(HSP 70)、CD類蛋白以及磷脂酶和其他脂質(zhì)相關(guān)蛋白,但是不同來源的外泌體的組成有差異。
在所有細(xì)胞中,均可以分泌外泌體,并且它還存在于體液,包括血液、尿液、腦脊液、唾液、乳汁中。
外泌體提取方式:
1.超速離心法:目前常用的提取方法。此種方法得到的外泌體量多,但是純度不足。
2.過濾離心法:這種操作簡便,不影響外泌體的生物活性 ,但純度不足。
3.密度梯度離心法:前期準(zhǔn)備工作繁雜,耗時(shí),量少,但純度高。
4.免疫磁珠法:特異性高、操作簡單保證外泌體形態(tài)完整,但會(huì)影響外泌體生物活性。
5.PS親合法:獲得的外泌體形態(tài)完整,純度高且不影響外泌體生物活性。
6.色譜法:分離的外泌體在TEM下大小均勻,但設(shè)備特殊。
外泌體鑒定方式:主要有四種方法:透射電子顯微鏡(TEM)、Nanosight、Western Blot和流式細(xì)胞術(shù)。
您可以使用以下任何一種親脂性熒光染料標(biāo)記膜和其他疏水結(jié)構(gòu),例如外泌體:
DiO(綠色熒光),DiI(橙色熒光),DiD(紅色熒光)和DiR(深紅色熒光)的獨(dú)特?zé)晒忸伾珵槎嗌上窈土魇郊?xì)胞儀分析提供了方便的工具。
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