bv-2細(xì)胞（貨號ZQ0397）
 

Bv-2細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)節(jié)

培養(yǎng)條件：

MEM（貨號：ZQ-300）+10%FBS（貨號：ZQ0500）+1%P/S（貨號：CSP006）+1%Sodium Pyruvate 100 mM Solution（貨號：CSP003）

中喬培養(yǎng)過程種添加丙酮酸鈉是因?yàn)?/span>丙酮酸鈉作為細(xì)胞能量來源，在細(xì)胞培養(yǎng)基中起到替代碳源的作用，參與細(xì)胞營養(yǎng)代謝，維持細(xì)胞的生長速度和狀態(tài)。
 

丙酮酸鈉（貨號：CSP003）
 

傳代比例：1:3-1:6，每2-3天換液一次

傳代步驟：

由于bv-2是半懸浮細(xì)胞，因此在如圖所示密度 80%-90%時(shí)，即可進(jìn)行傳代分瓶。

當(dāng)漂浮的懸浮細(xì)胞和圓潤細(xì)胞比較多時(shí)，建議先用吸管輕柔吹打4-6下收集懸浮細(xì)胞。當(dāng)漂浮圓潤細(xì)胞少時(shí)，則棄去培養(yǎng)上清，用PBS輕柔洗細(xì)胞1-2次。

加1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后用手掌心拍打瓶尾后，在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。（T25培養(yǎng)瓶建議添加3ml終止液）。

1:3-1:6輕輕打勻后吸出細(xì)胞懸液，在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘， 棄去上清液，用手指波動離心管彈松細(xì)胞沉淀。

補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后進(jìn)行1:3-1:6分瓶。再添加新鮮培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。（t25培養(yǎng)瓶建議添加5-7ml完全培養(yǎng)基。

凍存條件：無血清凍存液（液氮保存）
 

無血清細(xì)胞凍存液（貨號：CSP04)
 

Bv-2細(xì)胞培養(yǎng)問題

1、生長緩慢：

1.bv-2細(xì)胞增值速度很快，倍增時(shí)間約為25-35h，當(dāng)發(fā)現(xiàn)生長緩慢時(shí)排除污染的可能性，比如真菌污染，細(xì)菌污染，支原體污染等因素。

2.適當(dāng)提高一點(diǎn)血清含量，及補(bǔ)充丙酮酸鈉。

2、懸浮細(xì)胞變多？

1.Bv-2對培養(yǎng)基酸堿度比較敏感。PH偏堿時(shí)候，培養(yǎng)基呈紫紅色。在偏堿培養(yǎng)基中培養(yǎng)數(shù)小時(shí)后將會全部飄起。

2.由于bv-2生長速度快，1：3傳代后，48h后就需要換液，否則細(xì)胞密度過大，營養(yǎng)成分減少，容易出現(xiàn)大量細(xì)胞漂浮的情況，及時(shí)換液即可。

3、細(xì)胞容易聚團(tuán)？

1.BV2是一種半貼壁半懸浮細(xì)胞，它的形態(tài)并不規(guī)則，存在圓形和梭形兩種。當(dāng)圓形細(xì)胞聚成團(tuán)塊處于貼壁細(xì)胞上和培養(yǎng)基里時(shí)，說明細(xì)胞處于快速增值分裂的生長狀態(tài)，及時(shí)傳代處理即可。

4、貼壁細(xì)胞很瘦小？

1.Bv-2細(xì)胞出現(xiàn)瘦小、拉絲、不增值等情況時(shí)，可能是細(xì)胞存在微生物污染，刺激后自行分化、血清營養(yǎng)價(jià)值不高，消化傳代過度導(dǎo)致細(xì)胞膜損傷等情況導(dǎo)致細(xì)胞很瘦小。

2.建議排查污染源，更換血清，分化后的細(xì)胞貼壁更牢，極難消化，因此應(yīng)盡量縮短消化時(shí)間，預(yù)防細(xì)胞分化，重新復(fù)蘇新種子。

5.靜息與激活狀態(tài)下分別是什么樣子？

1.受到刺激的小膠質(zhì)細(xì)胞突起縮短變厚，胞體增大，呈現(xiàn)阿米巴樣

2.非激活狀態(tài)有觸角，LPS激活后觸角逐漸消失（激活BV2細(xì)胞形態(tài)有點(diǎn)像小眼睛）

3.靜息狀態(tài)下的細(xì)胞是成梭形有偽足的，受到刺激的bv-2突起縮短變厚，胞體增大，呈現(xiàn)阿米巴樣。

4.MEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基（貨號：ZQ-300）
 

MEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基（貨號：ZQ-300)