1. 收到細(xì)胞（貨號(hào)：CTCC-ACL-0131）后，75%酒精消毒，置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置2-3h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)；

2. 觀察細(xì)胞生長情況，細(xì)胞密度低于80%時(shí)，貼壁細(xì)胞倒去瓶中培養(yǎng)液，留下8ml作用繼續(xù)培養(yǎng)；細(xì)胞密度大于80%時(shí)，即可進(jìn)行傳代；

3. 培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)液收集，留3ml左右，輕輕拍打瓶底，用吸管吹打，將細(xì)胞吹打成細(xì)胞懸液（無需用胰蛋白酶消化）或者用細(xì)胞刮板輕輕刮下來；

4. 收集細(xì)胞懸液至離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，觀察細(xì)胞沉淀；

6.加入1ml的完全培養(yǎng)液，輕輕吹打成單細(xì)胞懸液，均勻分配至細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，初次傳代建議按照1：2比例進(jìn)行。

RAW264.7細(xì)胞株誘導(dǎo)處理

誘導(dǎo)操作及注意事項(xiàng)

1. 使用37℃預(yù)熱的破骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基（貨號(hào)：CCTCC-Y005）重懸細(xì)胞，按照5000~20000 cells/cm2密度進(jìn)行鋪板，48孔板培養(yǎng)基體積建議400-500μL。

2.細(xì)胞每隔1d全量換液一次，每次換液前破骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基應(yīng)37℃預(yù)熱

3. 誘導(dǎo)分化4-10天，可觀察到成熟的多核破骨細(xì)胞。

注意事項(xiàng)：以下情況都會(huì)造成破骨誘導(dǎo)不成功或者破骨分化效率低

（1）RAW264.7細(xì)胞分化程度過高，即未誘導(dǎo)時(shí)伸出偽足的細(xì)胞比例過高

（2）接種密度不恰當(dāng)

（3）長時(shí)間在培養(yǎng)箱外觀察

（4）實(shí)驗(yàn)時(shí)誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基未預(yù)熱

（5）誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基保存失當(dāng)，反復(fù)溫浴和冷藏交替
 

誘導(dǎo)中細(xì)胞狀態(tài)

 

誘導(dǎo)中細(xì)胞狀態(tài)
 

細(xì)胞樣本(以 48 孔板為例)：

1. 移除細(xì)胞培養(yǎng)液，每孔加入 400μL 1 號(hào)洗滌液（貨號(hào):CTCC-JD005）清洗，棄液；

2. 每孔加入 300μL 固定液，室溫固定 15-30min，棄液；

3. 每孔加入 300μL 2 號(hào)洗滌液，清洗 2 次；

4. 染色：每孔加入 150-200μL TRAP 染色液，37℃避光孵育 10-15min(待測樣品中酒石酸酸性磷酸酶活性較低時(shí)，可適當(dāng)延長孵育時(shí)間至 30 分鐘或顯微鏡下顯色至預(yù)期深淺)。

5.每孔加入 300μL 2 號(hào)洗滌液，清洗 2 次；

6.顯微鏡下觀察和拍照；

7.每孔加入 300μL 保存液，4℃放置，可保存一周。
 

客戶常見問題解答

1、為什么有的人誘導(dǎo)4天就成破骨了而我需要7天甚至更久呢？

答：誘導(dǎo)周期是動(dòng)態(tài)的過程，要結(jié)合誘導(dǎo)過程中細(xì)胞狀態(tài)來�？辞捌谑欠癯霈F(xiàn)過破骨又碎掉，如果是碎過一輪了，那就沒必要誘導(dǎo)了。如果至整個(gè)誘導(dǎo)周期中首次出現(xiàn)破骨，且細(xì)胞整體匯合度還比較低的情況，還是可以持續(xù)誘導(dǎo)的。

2、我誘導(dǎo)成功了什么時(shí)候進(jìn)行染色最適合呢？

答：誘導(dǎo)成功后立即進(jìn)行染色，破骨成熟期只有24小時(shí) 24小時(shí)后破骨會(huì)破碎。

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菩禾生物簡介
 

無錫菩禾生物技術(shù)有限公司(簡稱“菩禾”)成立于2013年，位于無錫國家生物產(chǎn)業(yè)基地---百橋生物科技園，是一家集成細(xì)胞生產(chǎn)、應(yīng)用的高新技術(shù)企業(yè)專注于為藥企、各類科研機(jī)構(gòu)及CRO企業(yè)提供符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范的細(xì)胞資源、細(xì)胞培養(yǎng)基、細(xì)胞檢測試劑盒和細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)備。公司還建有完善的細(xì)胞建系、細(xì)胞篩選、細(xì)胞建庫、細(xì)胞檢測等技術(shù)服務(wù)體系。目前建有的技術(shù)平臺(tái)有細(xì)胞生物學(xué)測試平臺(tái)、原代細(xì)胞分離平臺(tái)、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)平臺(tái)、免疫學(xué)平臺(tái)及分子生物學(xué)平臺(tái)。