確定熒光分子的亮度及選購方法
瀏覽次數(shù):875 發(fā)布日期:2024-3-20
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今天為大家介紹一個非常實用的小技巧,用于確定熒光分子的亮度。如果你想選購一種熒光探針,而你已經(jīng)確切的了解到了幾種探針均可以滿足你的實驗要求,但是,哪一個才是熒光強度好的呢?求人不如求己,實驗還得靠自己!今天小螢告訴你之后,請收藏好它!
熒光分子的亮度取決于兩個因素:
- 消光系數(shù)(ε):熒光分子吸收特定波長的光的強度。
- 熒光量子產(chǎn)率(Φ):吸收光轉(zhuǎn)換為發(fā)射光的效率。
有小伙伴要問了,知道了消光系數(shù)和熒光量子產(chǎn)率又該怎么辦呢?請記住以下公式:
亮度=消光系數(shù)(ε) x 熒光量子產(chǎn)率(Φ)
實例驗證:大家對于PE、APC、Cy5應(yīng)該都是比較熟悉的。
- PE = 1,960,000 cm-1M-1 (ε)x 0.84(Φ) = 1646400
- APC = 700,000 cm-1M-1 (ε)x 0.68 (Φ)= 476000
- Cy5 = 250,000 cm-1M-1 (ε)x 0.20 (Φ)= 50000
現(xiàn)在相信大家不用我說,也能看出哪個更亮了吧!那有小伙伴又要問了,可是熒光探針那么多,我找不到確切的消光系數(shù)和熒光量子產(chǎn)量啊!別著急,下面是我們?yōu)槟偨Y(jié)好的常用的產(chǎn)品消光系數(shù)和熒光量子產(chǎn)率請收好!
產(chǎn)品名稱 |
消光系數(shù)(ε)cm-1M-1 |
熒光量子產(chǎn)率(Φ) |
備注 |
iFluor 350 |
20000 |
0.95 |
在水性緩沖液中(pH=7.2) |
iFluor 405 |
37000 |
0.91 |
iFluor 430 |
40000 |
0.78 |
iFluor 450 |
40000 |
0.82 |
iFluor 488 |
75000 |
0.9 |
iFluor 514 |
80000 |
0.83 |
iFluor 532 |
90000 |
0.68 |
iFluor 546 |
100000 |
0.67 |
iFluor 555 |
100000 |
0.64 |
iFluor 560 |
120000 |
0.57 |
iFluor 568 |
100000 |
0.57 |
iFluor 594 |
180000 |
0.53 |
iFluor 610 |
110000 |
0.85 |
iFluor 633 |
250000 |
0.29 |
iFluor 647 |
250000 |
0.25 |
iFluor 660 |
250000 |
0.26 |
iFluor 670 |
250000 |
0.63 |
iFluor 680 |
220000 |
0.23 |
iFluor 700 |
220000 |
0.23 |
iFluor 750 |
275000 |
0.12 |
iFluor 790 |
250000 |
0.13 |
iFluor 800 |
250000 |
0.11 |
iFluor 810 |
250000 |
0.05 |
iFluor 820 |
250000 |
N/D |
iFluor 840 |
200000 |
0.02 |
在PBS中 |
產(chǎn)品名稱 |
消光系數(shù)(ε)cm-1M-1 |
熒光量子產(chǎn)率(Φ) |
備注 |
Alexa Fluor 488 |
73000 |
0.92 |
緩沖液(pH=7.2) |
Alexa Fluor 532 |
81000 |
0.61 |
Alexa Fluor 546 |
112000 |
0.1 |
Alexa Fluor 568 |
88000 |
0.69 |
Alexa Fluor 594 |
92000 |
0.66 |
Alexa Fluor 647 |
270000 |
0.33 |
Alexa Fluor 660 |
132000 |
0.37 |
Alexa Fluor 680 |
183000 |
0.36 |
Alexa Fluor 700 |
205000 |
0.25 |
Alexa Fluor 750 |
290000 |
0.12 |
產(chǎn)品名稱 |
消光系數(shù)(ε)cm-1M-1 |
熒光量子產(chǎn)率(Φ) |
備注 |
Cy3 |
150000 |
0.04 |
|
Cy3B |
120000 |
0.58 |
|
Cy3B酸 |
120000 |
0.58 |
|
Cy5 |
250000 |
0.27(PBS)/0.4(乙醇) |
|
Fluo-4 |
82000 |
0.16 |
|
Fluo-8 |
23430 |
0.16 |
|
Cal-590 |
78000 |
0.62 |
|
7-AAD |
27500 |
0.02 |
在雙鏈DNA結(jié)合的情況下 |
AFC |
17000 |
0.53 |
在乙醇中 |
Hoechst 33258 |
46000 |
0.034 |
|
SYTO 17 |
88000 |
0.964 |
|
SYTOX綠色 |
67000 |
0.53 |
在DNA中 |
JOJO-1 |
171000 |
0.44 |
在DNA中 |