ELISA實(shí)驗(yàn)檢測方法的特性綜述
酶聯(lián)免疫吸附測定 (ELISA) 是一種免疫學(xué)技術(shù)，用于檢測和測量特定蛋白質(zhì)，如生物樣品中的抗體、抗原和激素等。ELISA實(shí)驗(yàn)所有檢測方法擁有很明顯的局限性：
1、重復(fù)性不好；
2、收自身抗體、嗜異性抗體等干擾，易出現(xiàn)假陽性；
3、不論儀器和手工操作，干擾因素較多。影響最大的是溫度和時(shí)間。
下面分述ELISA實(shí)驗(yàn)各種檢測方法的局限性：
1、直接法（direct ELISA）
將抗原直接固定在固相載體上，參加酶符號的一級抗體，即可測定抗原總量，此一級抗體的特異性非常重要。
優(yōu)勢：操作手續(xù)簡略，因無須運(yùn)用二抗可防止交互反響。
缺陷：實(shí)驗(yàn)中的一抗都得用酶符號，但不是每種抗體都適合做符號，費(fèi)用相對進(jìn)步。
2.間接法（indirect ELISA）
此測定辦法與直接法相似，不一樣在于一級抗體沒有酶符號，改用酶符號的二級抗體去辨識一級抗體來測定抗原量。
優(yōu)勢：二抗能夠加強(qiáng)信號，并且有多種挑選能做不一樣的測定剖析。不加酶符號的一級抗體則能保存它最多的免疫反響性。
缺陷：交互反響發(fā)作的機(jī)率較高。
3.雙抗體夾心法（sandwich ELISA）
被檢測的抗原包被在兩個(gè)抗體之間，其間一個(gè)抗體將抗原固定于固相載體上，即捕捉抗體。另一個(gè)則是檢測抗體，此抗體可用酶符號后直接測定抗原的量；或不符號，再透過酶符號的二級抗體來測定抗原的量。這兩種抗體有必要當(dāng)心選擇，才可防止交互反響或競爭一樣的抗原聯(lián)系部位。
優(yōu)勢：高活絡(luò)、高專一性，抗原無須事前純化。
缺陷：抗原必定得具有兩個(gè)以上的抗體聯(lián)系部位。
4.競爭法（competitive ELISA）
樣本里的抗原（自在抗原）和純化并固定在固相載體上的抗原（固定抗原）一同競爭一樣的抗體，當(dāng)樣品里的自在抗原越多，就能夠聯(lián)系越多的抗體，而固定抗原就只能聯(lián)系到較少的抗體，反之亦然。經(jīng)清潔過程，洗去自在抗原和抗體的復(fù)合物，只留下固定抗原和抗體的復(fù)合物，拿來與只要固定抗原的對照組成果相比擬，依據(jù)呈色區(qū)別就可計(jì)算出樣品里的抗原含量。
優(yōu)勢：可適用比擬不純的樣本，并且數(shù)據(jù)再現(xiàn)性很高。
缺陷：全體的敏感性和專一性都較差。
綜上所述，它們具有不同的原理和特點(diǎn)，適用于不同的實(shí)驗(yàn)需求。在實(shí)際應(yīng)用中，應(yīng)根據(jù)目標(biāo)物質(zhì)的特點(diǎn)和實(shí)驗(yàn)要求選擇合適的ELISA測定方法。
1、重復(fù)性不好；
2、收自身抗體、嗜異性抗體等干擾，易出現(xiàn)假陽性；
3、不論儀器和手工操作，干擾因素較多。影響最大的是溫度和時(shí)間。
下面分述ELISA實(shí)驗(yàn)各種檢測方法的局限性：
1、直接法（direct ELISA）
將抗原直接固定在固相載體上，參加酶符號的一級抗體，即可測定抗原總量，此一級抗體的特異性非常重要。
優(yōu)勢：操作手續(xù)簡略，因無須運(yùn)用二抗可防止交互反響。
缺陷：實(shí)驗(yàn)中的一抗都得用酶符號，但不是每種抗體都適合做符號，費(fèi)用相對進(jìn)步。
2.間接法（indirect ELISA）
此測定辦法與直接法相似，不一樣在于一級抗體沒有酶符號，改用酶符號的二級抗體去辨識一級抗體來測定抗原量。
優(yōu)勢：二抗能夠加強(qiáng)信號，并且有多種挑選能做不一樣的測定剖析。不加酶符號的一級抗體則能保存它最多的免疫反響性。
缺陷：交互反響發(fā)作的機(jī)率較高。
3.雙抗體夾心法（sandwich ELISA）
被檢測的抗原包被在兩個(gè)抗體之間，其間一個(gè)抗體將抗原固定于固相載體上，即捕捉抗體。另一個(gè)則是檢測抗體，此抗體可用酶符號后直接測定抗原的量；或不符號，再透過酶符號的二級抗體來測定抗原的量。這兩種抗體有必要當(dāng)心選擇，才可防止交互反響或競爭一樣的抗原聯(lián)系部位。
優(yōu)勢：高活絡(luò)、高專一性，抗原無須事前純化。
缺陷：抗原必定得具有兩個(gè)以上的抗體聯(lián)系部位。
4.競爭法（competitive ELISA）
樣本里的抗原（自在抗原）和純化并固定在固相載體上的抗原（固定抗原）一同競爭一樣的抗體，當(dāng)樣品里的自在抗原越多，就能夠聯(lián)系越多的抗體，而固定抗原就只能聯(lián)系到較少的抗體，反之亦然。經(jīng)清潔過程，洗去自在抗原和抗體的復(fù)合物，只留下固定抗原和抗體的復(fù)合物，拿來與只要固定抗原的對照組成果相比擬，依據(jù)呈色區(qū)別就可計(jì)算出樣品里的抗原含量。
優(yōu)勢：可適用比擬不純的樣本，并且數(shù)據(jù)再現(xiàn)性很高。
缺陷：全體的敏感性和專一性都較差。
綜上所述，它們具有不同的原理和特點(diǎn)，適用于不同的實(shí)驗(yàn)需求。在實(shí)際應(yīng)用中，應(yīng)根據(jù)目標(biāo)物質(zhì)的特點(diǎn)和實(shí)驗(yàn)要求選擇合適的ELISA測定方法。
- 全球12款獲批CAR-T細(xì)胞療法全解析：適應(yīng)癥與臨床效果概覽
- 配位聚合物和金屬-有機(jī)框架在先進(jìn)電池材料領(lǐng)域中的應(yīng)用
- 抑制劑、細(xì)胞因子、人源單抗在腫瘤類器官中的應(yīng)用
- 常見蛋白純化方法及全能核酸酶在解決核酸殘問題中的優(yōu)勢
- 蛋白水解靶向嵌合體 (PROTAC)的結(jié)構(gòu)、優(yōu)化方法及臨床應(yīng)用挑戰(zhàn)
- CDE最新發(fā)布新藥研發(fā)指導(dǎo)原則（征求意見稿）全文
- ROR1作為ADC藥物潛力開發(fā)靶點(diǎn)存在的挑戰(zhàn)
- Nature分享：血小板降解劑DePLT抑制癌癥復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的作用原理及優(yōu)勢
- 天隆人類基因多態(tài)性檢測試劑盒獲批NMPA三類注冊上市
- 陶術(shù)直播：類器官在生物學(xué)和精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用與前景
- 逐典校園行，消化液、核酸酶等明星產(chǎn)品走進(jìn)上海高校
- 第二屆CMC（泰州）復(fù)雜制劑產(chǎn)業(yè)化論壇報(bào)名邀請
- cytiva密度梯度試劑Ficoll、Percoll火熱促銷中
- 上海領(lǐng)駿生物精彩亮相中國國際投資貿(mào)易洽談會
- 博鷺騰免疫蛋白印跡系列試劑助力開學(xué)季,加18元多1件
- 陶術(shù)生物直播預(yù)告：調(diào)節(jié)脂代謝治療癌癥和其它疾病
Copyright(C) 1998-2024 生物器材網(wǎng) 電話：021-64166852;13621656896 E-mail：info@bio-equip.com