培養(yǎng)基(Medium)是供微生物、植物組織和動物組織生長和維持用的人工配制的養(yǎng)料，一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無機鹽(包括微量元素)以及維生素和水等。不同培養(yǎng)基可根據(jù)實際需要，添加一些自身無法合成的化合物，即生長因子。培養(yǎng)基的制備程序不同類型培養(yǎng)基制備的程序也不盡相同。
 

培養(yǎng)基配置原則：

1.選擇適宜的營養(yǎng)物質(zhì)

總體而言，所有微生物生長繁殖均需要培養(yǎng)基含有碳源、氮源、無機鹽、生長因子、水及能源，但由于微生物營養(yǎng)類型復(fù)雜，不同微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的需求是不一樣的，因此首先要根據(jù)不同微生物的營養(yǎng)需求配制針對性強的培養(yǎng)基。自養(yǎng)型微生物能從簡單的無機物合成自身需要的糖類、脂類、蛋白質(zhì)、核酸、維生素等復(fù)雜的有機物，因此培養(yǎng)自養(yǎng)型微生物的培養(yǎng)基完全可以(或應(yīng)該)由簡單的無機物組成。

就微生物主要類型而言，有細菌、放線菌、酵母菌、霉菌、原生動物、藻類及病毒之分，培養(yǎng)它們所需的培養(yǎng)基各不相同。在實驗室中常用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基(或簡稱普通肉湯培養(yǎng)基)培養(yǎng)細菌，用高氏I號合成培養(yǎng)基培養(yǎng)放線菌，培養(yǎng)酵母菌一般用麥芽汁培養(yǎng)基，培養(yǎng)霉菌則一般用查氏合成培養(yǎng)基。

2.營養(yǎng)物質(zhì)濃度及配比合適

培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)濃度合適時微生物才能生長良好，營養(yǎng)物質(zhì)濃度過低時不能滿足微生物正常生長所需，濃度過高時則可能對微生物生長起抑制作用，例如高濃度糖類物質(zhì)、無機鹽、重金屬離子等不僅不能維持和促進微生物的生長，反而起到抑菌或殺菌作用。

另外，培養(yǎng)基中各營養(yǎng)物質(zhì)之間的濃度配比也直接影響微生物的生長繁殖和(或)代謝產(chǎn)物的形成和積累，其中碳氮比(C/N)的影響較大。嚴格地講，碳氮比指培養(yǎng)基中碳元素與氮元素的物質(zhì)的量比值，有時也指培養(yǎng)基中還原糖與粗蛋白之比。

3.控制pH條件

培養(yǎng)基的pH必須控制在一定的范圍內(nèi)，以滿足不同類型微生物的生長繁殖或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物。各類微生物生長繁殖或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物的最適pH條件各不相同，一般來講，細菌與放線菌適于在pH7-7.5范圍內(nèi)生長，酵母菌和霉菌通常在pH4.5-6范圍內(nèi)生長。

4.控制氧化還原電位(redox potential)

不同類型微生物生長對氧化還原電位(F)的要求不一樣，一般好氧性微生物在F值為+0.1V以上時可正常生長，一般以+0.3一+0.4V為宜，厭氧性微生物只能在F值低于+0.1V條件下生長，兼性厭氧微生物在F值為+0.1V以上時進行好氧呼吸，在+0.1V以下時進行發(fā)酵。F值與氧分壓和pH有關(guān)，也受某些微生物代謝產(chǎn)物的影響。在pH相對穩(wěn)定的條件下，可通過增加通氣量(如振蕩培養(yǎng)、攪拌)提高培養(yǎng)基的氧分壓，或加入氧化劑，從而增加F值；在培養(yǎng)基中加入抗壞血酸、硫化氫、半胱氨酸、谷胱甘肽、二硫蘇糖醇等還原性物質(zhì)可降低F值。

5.原料來源的選擇

在配制培養(yǎng)基時應(yīng)盡量利用廉價且易于獲得的原料作為培養(yǎng)基成分，特別是在發(fā)酵工業(yè)中，培養(yǎng)基用量很大，利用低成本的原料更體現(xiàn)出其經(jīng)濟價值。

6.滅菌處理

要獲得微生物純培養(yǎng)，必須避免雜菌污染，因此對所用器材及工作場所進行消毒與滅菌。對培養(yǎng)基而言，更是要進行嚴格的滅菌。對培養(yǎng)基一般采取高壓蒸汽滅菌，一般培養(yǎng)基用1.05kg/cm2，121.3℃條件下維持15-30min可達到滅菌目的。

培養(yǎng)基配置的一般可分為：配料、溶化、矯正pH、澄清過濾、分裝、滅菌及檢定等8個步驟。

1，配料：按培養(yǎng)基處方準確稱取各種成分，先在三角燒瓶中加入少量蒸餾水，再加入各種成分，以防蛋白胨等粘附于瓶底，然后再以剩余的水沖洗瓶壁。

2，溶化：將各種成分混勻于水中，以流通蒸氣溶化半小時，如在電爐上溶化應(yīng)隨時攪拌，如有瓊脂成分時geng應(yīng)注意防止外溢。溶化完畢，補足失去的水分。

3，矯正pH：pH測定，取與標準管同口徑的試管（通常用華氏試管）3支，于第1、3管各加入欲測定pH的的培養(yǎng)基5ml，并于第1管中加入0.2g／L的酚紅0.25ml作為測定管，混勻醫(yī)學(xué)|教育網(wǎng)搜集整理；于第2管加入蒸餾水5ml，第4管為pH標準比色管。 pH的校正，若測定管過酸或過堿可用0.1mol／L氫氧-化鈉或0.1mol／L鹽酸溶液矯正，直至顏色與標準管相同為止，加堿或加酸時要精-確緩慢，每加1滴后要充分混勻，比色后再加第2滴（有時僅加半滴）準確記錄加入的量。 計算，設(shè)5ml培養(yǎng)基矯正pH至7.4時需0.1mol／L氫氧-化鈉0.15ml，現(xiàn)有培養(yǎng)基4990ml，需加氫氧-化鈉的量可按下列方法計算：5∶4990＝0.15∶X  X＝0.15×4990/5＝149.7（ml），如將此0.1mol／L的氫氧-化鈉改用1mol／L的氫氧-化鈉時，則需14.9ml即可。

4，過濾澄清：培養(yǎng)基配制后一般都有沉渣或混濁出現(xiàn)，需過濾成清晰透明后方可使用，常用的過濾方法如下：
液體培養(yǎng)基必須清晰，以便觀察細菌的生長情況，常用濾紙過濾，亦可在加熱前加入用水稀釋的雞蛋白（1000ml培養(yǎng)基用1個雞蛋白）在100℃加熱后保持60～70℃40～60分鐘，使其不溶性物質(zhì)附于凝固的蛋白上而沉淀，然后再用虹吸法吸出上清液或以濾紙過濾。固體培養(yǎng)基如系瓊脂培養(yǎng)基，于加熱融化后需趁熱以絨布或兩層紗布中夾脫脂棉過濾；亦可用自然沉淀法，即將瓊脂培養(yǎng)基盛人鋁鍋或廣口搪瓷容器內(nèi)，以高壓（103.43kPa）蒸汽融化15分鐘后，靜置高壓鍋內(nèi)過夜，次日將瓊脂傾出，用刀將底部沉渣切去，再融化即可收清晰的瓊脂培養(yǎng)基。

5，分裝：根據(jù)需要將培養(yǎng)基分裝于不同容量的三角燒瓶、試管中。分裝的量不宜超過容器的2／3以免滅菌時外溢。瓊脂斜面分裝量為試管容量的1／5，滅菌后須趁熱放置成斜面，斜面長約為試管長的2／3。半固體培養(yǎng)基分裝量約為試管長的1／3，滅菌后直立凝固待用。高層瓊脂分裝量約為試管的1／3，滅菌后趁熱直立，待冷后凝固待用。液體培養(yǎng)基分裝于試管中，約是試管長度的1／3。瓊脂平板：將滅菌（或加熱融化）后的培養(yǎng)基冷至50℃左右，以無菌手續(xù)傾人滅菌平皿內(nèi)，內(nèi)徑9cm的平皿傾注培養(yǎng)基約13～15ml，輕搖平皿底醫(yī)學(xué)|教育網(wǎng)搜集整理，使培養(yǎng)基平鋪于平皿底部，待凝固后即成，傾注時，切勿將皿蓋全部啟開，以免空氣中塵埃及細菌落入。新制成的平板培養(yǎng)基（簡稱平板），表面水分較多，不利于細菌的分離，通常應(yīng)將平皿倒扣擱置于37℃培養(yǎng)箱內(nèi)約30分鐘待平板平面干燥后使用。

6，滅菌：不同成分、性質(zhì)的培養(yǎng)基，可采用不同的滅菌方法。高壓蒸汽滅菌法：高壓滅菌的溫度與時間隨種類及數(shù)量的不同有所差別，一般少量分裝時高壓（103.43kPa）滅菌15分鐘即可，分裝量較大時，可高壓（103.43kPa）滅菌30分鐘，含糖的培養(yǎng)基高壓（55.16kPa）滅菌15分鐘。以免糖類被破壞。

7，檢定：每批制成后須經(jīng)檢定方可使用，檢定時將培養(yǎng)基放37℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)24小時后，證明無菌，同時用已知菌種檢查在此培養(yǎng)基上生長繁殖及生化反應(yīng)情況，符合要求者方可使用。

8，保存：制好的培養(yǎng)基，不宜保存過久，以少量勤做為宜。每批應(yīng)注明名稱，分裝量，制作日期等，放在4℃冰箱內(nèi)備用。