細(xì)胞培養(yǎng)是每個實驗者都會使用的技術(shù)，但是細(xì)胞在培養(yǎng)過程中常受到許多不同來源的污染，如細(xì)菌、真菌、支原體和內(nèi)毒素污染等等，其中支原體污染最難發(fā)現(xiàn)和處理。綜合FDA、ATCC等機(jī)構(gòu)收集到的相關(guān)數(shù)據(jù)，世界各國細(xì)胞系支原體污染的平均比例為30-60%。它們不僅與宿主競爭營養(yǎng)，還會掩蓋一些化合物毒性影響，因此細(xì)胞受到支原體污染后不但會抑制生長和新陳代謝、改變DNA轉(zhuǎn)染效率，甚至最終會導(dǎo)致細(xì)胞死亡，嚴(yán)重影響實驗結(jié)果的可靠性、重復(fù)性及一致性，所以在實驗中定期做好支原體預(yù)防、檢測和清除極為關(guān)鍵。

 

支原體污染細(xì)胞狀態(tài) 圖片來源網(wǎng)絡(luò)

 

什么是支原體？

支原體模式圖 圖片引自David S. Goodsell手繪

 

支原體又稱霉形體，是目前發(fā)現(xiàn)最微小、能夠自我復(fù)制且不具有細(xì)胞壁的原核生物，直徑大小僅為50-300nm，可通過濾菌器； 支原體可分為口腔支原體、精氨酸支原體、豬鼻支原體、發(fā)酵支原體、人型支原體、唾液支原體、肺支原體和梨支原體等多種類型。

 

支原體污染對細(xì)胞的危害

●抑制細(xì)胞生長和新陳代謝；

●干擾核酸合成，染色體畸變；

●改變細(xì)胞膜抗原性，并可能改變DNA轉(zhuǎn)染效率；

●增加了對凋亡誘導(dǎo)物的敏感性；

●細(xì)胞死亡。
 

圖片引自Lonza官網(wǎng)

 

支原體污染來源

典型的支原體污染來源比較廣泛，通常包括以下幾種來源：

●未檢測細(xì)胞之間交叉污染；

●實驗室環(huán)境或?qū)嶒炂鞑牡闹苯游廴荆?/span>

●培養(yǎng)基或其他試劑污染；

●實驗人員無菌操作不當(dāng)；

●制備細(xì)胞的組織或器官產(chǎn)生污染。

 

支原體污染的特性

一般細(xì)胞被支原體污染了幾個月都沒有被發(fā)現(xiàn)，支原體污染之所以很難檢測和預(yù)防，是因為其具有非常高的隱蔽性，具體如下：

●體積非常小，即使在支原體高濃度（>107 cfu/ml）下，顯微鏡下也不可見；

●相對于細(xì)菌污染，支原體污染不會引起渾濁或PH值改變等可見變化；

●大部分用于細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)的抗生素對支原體無效；

●常規(guī)的過濾也無法去除支原體。

 

如何預(yù)防支原體污染？

如何進(jìn)行安全的細(xì)胞培養(yǎng)并預(yù)防支原體的污染呢？優(yōu)寧維為大家總結(jié)了十大技巧：

●穿戴適當(dāng)?shù)膫�人防護(hù)設(shè)備(手套、專用的干凈實驗服、護(hù)目鏡)并消毒手套

●在細(xì)胞處理開始前以及處理不同細(xì)胞系之間擦拭安全柜中的工作桌面

●避免在你的細(xì)胞上說話或打噴嚏

●避免飛濺、溢出和氣溶膠

●為每個細(xì)胞系使用指定的培養(yǎng)基瓶

●定期清潔培養(yǎng)箱，包括水盤

●定期清空及清潔水浴設(shè)備

●細(xì)胞復(fù)蘇幾天后測試新細(xì)胞培養(yǎng)物的支原體污染

●隔離所有進(jìn)入實驗室的細(xì)胞培養(yǎng)物,直到它們經(jīng)過支原體檢測

●不要忘記：每2周進(jìn)行一次支原體的常規(guī)檢測

 

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