MTT法：又稱 MTT 比色法。其檢測(cè)原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性 MTT 還原為不溶于水的藍(lán)紫色結(jié)晶甲臜 (Formazan) 并沉積在細(xì)胞中，但死細(xì)胞無此功能，后經(jīng) DMSO 溶解，于 490 nm 處測(cè)定吸光值便可間接反應(yīng)細(xì)胞活力。但該方法除去操作步驟耗時(shí)以外，生成的 Formazan 是不溶于水的，需經(jīng) DMSO 溶解后才能檢測(cè)，增加了工作量的同時(shí)仍不能保證測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性，且該溶劑對(duì)人體具有明顯毒性。
 

CCK8法：相較于 MTT，無論是操作步驟還是檢測(cè)時(shí)間都優(yōu)化了很多。CCK8 是一種基于 WST-8 而廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速、高靈敏度、無放射性的比色檢測(cè)方法。但在實(shí)驗(yàn)時(shí)，一直有個(gè)問題讓人很困擾——“細(xì)胞增殖越多越快，則顏色越深；細(xì)胞毒性越大，則顏色越淺”，但這個(gè)顏色深淺的標(biāo)準(zhǔn)我 “標(biāo)” 不出來怎么辦？痛點(diǎn)！痛點(diǎn)！痛點(diǎn)！
 

CTG 發(fā)光法：基于高靈敏度生物發(fā)光檢測(cè)技術(shù)，通過對(duì)三磷酸腺苷 (ATP) 進(jìn)行定量以測(cè)定培養(yǎng)物中活細(xì)胞數(shù)目及細(xì)胞活力。該實(shí)驗(yàn)方法可用三個(gè)字簡(jiǎn)單概括 “快、準(zhǔn)、狠”，比 MTT 的處理速度快近 20 倍，節(jié)省時(shí)間近 4 小時(shí)。CTG 特有的均質(zhì)檢測(cè)法即 “加樣-混樣-檢測(cè)”，使用時(shí)，只需將本試劑等體積添加至培養(yǎng)細(xì)胞中即可進(jìn)行檢測(cè)。不用感慨，細(xì)胞活力檢測(cè)為什么不能如此簡(jiǎn)單？

二， MTT、CCK8 與 CTG 法特點(diǎn)比較
 

三，CTG適用于哪些實(shí)驗(yàn)？

首先，來了解實(shí)驗(yàn) CTG 發(fā)光法的測(cè)定原理：ATP 作為細(xì)胞新陳代謝的一個(gè)重要指標(biāo)，與活細(xì)胞數(shù)目呈良好的線性關(guān)系，是細(xì)胞活力檢測(cè)的重要標(biāo)志性分子。

ATP 生物發(fā)光的原理為：熒光素酶以熒光素、ATP 和 O2 為底物，在 Mg2+ 存在時(shí)，可將化學(xué)能轉(zhuǎn)化為光能；在熒光素酶催化的發(fā)光反應(yīng)中，ATP 在一定的濃度范圍內(nèi)，其濃度與發(fā)光強(qiáng)度呈線性關(guān)系，即在光信號(hào)與酶反應(yīng)體系中，發(fā)光值與 ATP 呈正比，ATP 與活細(xì)胞數(shù)成正比，CTG 發(fā)光法通過 ATP 含量來進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)或活力測(cè)定，且不受化合物自發(fā)熒光的影響 (圖 2)，是細(xì)胞增殖測(cè)定，細(xì)胞活力測(cè)定和細(xì)胞毒性高通量篩選分析的理想選擇。