1、什么是細胞培養(yǎng)？ 細胞培養(yǎng)是指將細胞從動物或植物體內取出，然后在適宜的人工環(huán)境中生長的過程。細胞可以在培養(yǎng)前直接從組織中取出并通過酶或機械方法進行解離，也可以來源于已建立的細胞系或細胞株。
（1）原代培養(yǎng)
原代培養(yǎng)是指細胞從組織中分離出來后，在適宜條件下增殖，直到它們占據(jù)所有可用的基質（即達到匯合狀態(tài)）的培養(yǎng)階段。在此階段，必須通過將細胞轉移到含有新鮮生長培養(yǎng)基的新容器中進行繼代培養(yǎng)（即傳代），以為其提供更多的繼續(xù)生長空間。
（2）細胞系
第一次傳代培養(yǎng)后，原代培養(yǎng)物即被稱為細胞系。來自于原代培養(yǎng)的細胞系壽命有限，隨著細胞的傳代，生長能力最強的細胞會占據(jù)優(yōu)勢，最終導致細胞群體在基因型和表型上達到一定程度的均一性。
（3）細胞株
如果通過克隆或其他方法從培養(yǎng)物中陽性篩選出了細胞系的亞群，則該細胞系成為一個細胞株。與親代細胞系起始時相比，細胞株通常會獲得一些其他的遺傳學改變。
2、細胞培養(yǎng)的應用 細胞培養(yǎng)是細胞生物學和分子生物學所使用的一項重要技術，為細胞正常生理和生化研究（如代謝研究、衰老研究）、藥物和毒性化合物對細胞的作用、以及致突變性和致癌性研究提供了上佳的模型系統(tǒng)。細胞培養(yǎng)還可用于藥物篩選和開發(fā)，以及生物化合物（如疫苗、治療性蛋白質）的大規(guī)模生產。
在這些應用中，使用細胞培養(yǎng)的一大優(yōu)勢在于，使用來源于同一克隆的一批細胞可獲得穩(wěn)定一致、可重復的結果。
3、細胞的形態(tài) 根據(jù)細胞的形狀和外觀（即形態(tài)），可將其分為三大類。
（1）成纖維（或成纖維細胞樣）細胞是雙極或多極細胞，呈細長的形狀，并附著在基質上生長。
（2）上皮樣細胞呈多邊形，尺寸更規(guī)則，并附著在基質上分呈散在斑片狀生長。
（3）淋巴母細胞樣細胞呈球形，通常懸浮而不附著于表面生長。
4、細胞培養(yǎng)的方式
（1）貼壁培養(yǎng)
貼壁培養(yǎng)主要適用于貼壁依賴性細胞。此類需要相互依賴，需貼附于不起化學作用的物質（玻璃或塑料等無活性物質）的表面生長、生存和維持，并終在附著面生長至單層，鋪滿平面時便會發(fā)生接觸抑制。
（2）懸浮培養(yǎng)
來源于血液、淋巴組織的細胞，及許多腫瘤細胞（包括雜交瘤細胞）和某些轉化細胞等屬于懸浮培養(yǎng)型細胞，細胞為非貼壁依賴性細胞，無需支撐面，細胞或細胞聚集體懸浮于液體培養(yǎng)基中增殖。
5、常用的細胞類型舉例
（1）293細胞
很常用的表達研究外源基因的細胞株。細胞總體上分為293T和293F兩種類型，293T貼壁培養(yǎng)，293F懸浮培養(yǎng)。
來源：人體腎臟
形態(tài)：上皮細胞
注釋：該細胞含腺病毒5DNA
培養(yǎng)液：MEM，10%FBS
傳代：吸去培養(yǎng)液。用0.25%(w/v)Trypsin-0.53mMEDTA洗一次，以去除血清（血清會抑制胰酶的活性）。加2-3毫升Trypsin-EDTA，放在37℃培養(yǎng)箱內約5分鐘，直到細胞全部脫落。加6-8毫升培養(yǎng)液，用移液器把細胞吹散。加適量的細胞到新的培養(yǎng)器皿中。（以1：2到1：4為宜，傳代期間培養(yǎng)液2-3天更換1次）
凍存：95%培養(yǎng)液+5%DMSO凍存于液氮。
（2）CHO-K1 細胞實驗中常用細胞株，在生物制藥中使用也非常廣泛。該細胞株培養(yǎng)條件簡單，貼壁強度適中，比較容易轉染，很適合用它來研究一般哺乳動物基因的功能。
來源：Cricetulusgriseus(中國倉鼠)卵巢
形態(tài)：表皮細胞
注釋：CHO-K1由CHO衍生而來，CHO是T.T.Puck在1957年從一只成年中國倉鼠卵巢獲得的。
培養(yǎng)液：F-12，10%FBS
傳代：吸去培養(yǎng)液。用0.25%(w/v)Trypsin-0.53mMEDTA洗一次，以去除血清（血清會抑制胰酶的活性）。加2-3毫升Trypsin-EDTA，放在37℃培養(yǎng)箱內約5分鐘，直到細胞全部脫落。加6-8毫升培養(yǎng)液，用移液器把細胞吹散。加適量的細胞到新的培養(yǎng)器皿中。（以1：4到1：8為宜，傳代期間培養(yǎng)液更換1-2次）
凍存：95%培養(yǎng)液+5%DMSO凍存于液氮。
（3）Vero細胞 Vero細胞成功用來培養(yǎng)狂犬病疫苗、乙腦疫苗等多種疫苗，在非典期間又為研究冠狀病毒做出貢獻，在醫(yī)藥研究種廣泛應用。
來源：非洲綠猴腎細胞
形態(tài)：上皮細胞
注釋：該細胞是日本千葉大學的Y.Yasumura和Y.Kawakita于1962年3月27日從一只正常的成年非洲綠猴腎組織培養(yǎng)出來的。
培養(yǎng)液：MEM，10%FBS
傳代：吸去培養(yǎng)液。用0.25%(w/v)Trypsin-0.53mMEDTA洗一次，以去除血清（血清會抑制胰酶的活性）。加2-3毫升Trypsin-EDTA，放在37℃培養(yǎng)箱內約5分鐘，直到細胞全部脫落。加6-8毫升培養(yǎng)液，用移液器把細胞吹散。加適量的細胞到新的培養(yǎng)器皿中。（以1：3至1：6為宜，傳代期間培養(yǎng)液每周更換2-3次）
凍存：95%培養(yǎng)液+5%DMSO凍存于液氮
（4）Hela細胞 Hela細胞是在所有細胞株中最著名的。它來源于美國的HelenLane，1951年死于子宮頸癌。但源自她的腫瘤的細胞卻在世界各地的實驗室中得到廣泛的使用。
來源：人宮頸癌 
形態(tài)：上皮細胞 
注釋：Hela細胞顯角蛋白免疫沉淀染色陽性，包含HPV-18序列，有正常水平的pRB和p53的低水平表達。
培養(yǎng)液：MEM，10%FBS
傳代：吸去培養(yǎng)液。用0.25%（w/v）Trypsin-0.53mMEDTA洗一次，以去除血清（血清會抑制胰酶活性）。加2-3毫升Trypein-EDTA，放37℃培養(yǎng)箱內約5分鐘，直到細胞全部脫落。加6-8毫升培養(yǎng)液，用移液器把細胞吹散。加適量的細胞到新的培養(yǎng)器皿中。（以1：2到1：6為宜，每周傳代2-3次）
凍存：95%培養(yǎng)液+5%DMSO凍存于液氮。
（5）Sf9細胞 Sf9細胞常在Baculovirus（桿狀病毒）表達系統(tǒng)中用作宿主細胞，來表達外源蛋白。
來源：敘利亞倉鼠腎細胞
形態(tài)：纖維原細胞
生長特性：貼壁/懸浮
注釋：這個細胞來自于一只出生一天的新生倉鼠，隨后被改造成一個易于作表達的宿主細胞株。
培養(yǎng)液：TNM-FH，10%FBS
傳代：每隔一天用新鮮的培養(yǎng)基將其稀釋到新的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。
凍存：95%培養(yǎng)液+5%DMSO凍存于液氮。
（6）HepG2細胞 HepG2細胞來源于一個15歲白人的肝癌組織。該細胞分泌多種血漿蛋白：清蛋白、α2-巨球蛋白、血纖維蛋白溶酶原、鐵傳遞蛋白等。該細胞能大容量培養(yǎng)，乙肝表面抗原陰性，對G418有抗性，對人生長激素有刺激反應。
來源：人肝癌細胞
形態(tài)：上皮細胞
生長特性：貼壁
注釋：該細胞表達3-羥基-3-甲基戊二酸輔酶A還原酶和肝甘油三酸脂脂肪酶。該細胞在有百草枯(英文名：gramoxone)的環(huán)境下過氧化氫酶mRNA表達增加，ApoA-ImRNA表達減少。
培養(yǎng)液：MEM，10%FBS。
凍存：95%培養(yǎng)液+5%DMSO凍存于液氮。
6、細胞培養(yǎng)的環(huán)境
細胞培養(yǎng)基是培養(yǎng)環(huán)境中最重要的組成部分，因為它為細胞生長提供了必要的營養(yǎng)、生長因子和激素，并調節(jié)培養(yǎng)物的pH值和滲透壓。
（1）基礎培養(yǎng)基
大多數(shù)細胞系在含有氨基酸、維生素、無機鹽和碳源（例如葡萄糖）的基礎培養(yǎng)基中生長良好，但在這些基礎培養(yǎng)基的配方中必須進一步添加血清。
（2）減血清培養(yǎng)基
在細胞培養(yǎng)實驗中，減少血清不良影響的另一種策略是使用減血清培養(yǎng)基。減血清培養(yǎng)基是富含營養(yǎng)物質和動物源性因子的基礎培養(yǎng)基配方，可減少所需的血清量。
（3）無（免）血清培養(yǎng)基
無血清培養(yǎng)基（SFM）通過用適當?shù)臓I養(yǎng)和激素配方替代血清，避免了使用動物血清的問題。無血清培養(yǎng)基配方適用于許多原代培養(yǎng)物和細胞系，包括用于生產重組蛋白的中國倉鼠卵巢（CHO）細胞系、各種雜交瘤細胞系、昆蟲細胞系Sf9和Sf21（草地貪夜蛾）以及用作病毒生產宿主的細胞系（例如293、VERO、MDCK、MDBK等）。使用無血清培養(yǎng)基的主要優(yōu)勢之一是，能夠通過選擇生長因子的適當組合使培養(yǎng)基對特定細胞類型具有選擇性。
7、細胞培養(yǎng)基的各成分以及理化性質
細胞培養(yǎng)基必須含有充分的營養(yǎng)物質，才能滿足新細胞合成、細胞代謝等生化反應所需要的物質和能量。細胞培養(yǎng)基的主要成份是水、氨基酸、維生素、碳水化合物、無機鹽和其它一些輔助營養(yǎng)物質等。此外，還可能含有血清、血清替代成分、pH指示劑等。
（1）水
水是細胞的主要成分，也是細胞賴以生存的主要環(huán)境。細胞培養(yǎng)液中90%以上的成份是水。細胞對水的品質非常敏感，水的品質將直接影響細胞培養(yǎng)的效果。而水中通常含有重金屬、氯、磷、有機物、熱原等污染物，細胞培養(yǎng)用水須經過純化，品質應符合中國藥典注射用水標準或者超純水的標準。
（2）能源和碳源
能源和碳源是用于維持細胞生命和支持細胞生長，主要包括糖、糖酵解的產物和谷氨酰胺，其他氨基酸是次要的能源和碳源物質。細胞能夠利用的糖類主要是六碳糖，目前大多體外培養(yǎng)時選取葡萄糖作為細胞的主要碳源和能量來源，因此細胞培養(yǎng)基中基本都含有葡萄糖，含量一般為5～25mmol/L。
在葡萄糖濃度較高時，細胞主要通過擴散作用吸收葡萄糖，細胞膜內外的葡萄糖濃度梯度是細胞吸收葡萄糖的動力；在葡萄糖濃度較低時，主要由鈉離子推動的高親和性轉運過程使細胞攝取葡萄糖。葡萄糖進入細胞后參與糖酵解、核酸代謝、糖原合成、能量代謝以及一些氨基酸的合成。與體內的能量供應途徑不同，體外培養(yǎng)時，一定的濃度范圍條件下，葡萄糖主要經糖酵解循環(huán)轉化成乳酸來為細胞提供能量。
（3）氮源（氨基酸）
氨基酸在細胞內的重要生理作用主要體現(xiàn)在以下幾個方面：
①是蛋白質的基本組成單位，用于合成蛋白質和多肽；
②可用于合成某些具有重要生理作用的含氮化合物，如核酸、尼克酰胺等；
③某些氨基酸還具有獨特的生理作用，如甘氨酸參與生物轉化作用，丙氨酸和谷氨酰胺參與細胞內氨的運輸?shù)龋?br /> ④可轉變成糖類和脂肪，參與氧化供能。
絕大部分細胞對谷氨酰胺有較高的要求，可能因其不僅是細胞的主要氮源，且可作為細胞生長的能源物質和嘌呤、嘧啶核苷酸的前體，另外還可直接作為細胞增殖和產物合成中的蛋白質和多肽的組成成分。在缺少谷氨酰胺時，細胞會生長不良，甚至死亡。由于谷氨酰胺具有多種生理作用，體外動物細胞培養(yǎng)時需要大量谷氨酰胺，利用量常超過其他必須氨基酸利用量的總和。
（4）維生素
維生素是維持細胞生長的生物活性物質，在細胞代謝中起調節(jié)及控制作用。維生素可分為水溶性和脂溶性兩類，水溶性維生素主要包括泛酸、維生素B12、葉酸、煙酰胺、吡哆醛、硫胺素、核黃素、維生素C、膽堿、肌醇等；脂溶性維生素主要包括維生素A、D、E、K等；有的培養(yǎng)液中還直接采用ATP和輔酶A；大部分培養(yǎng)基中還有生物素。
許多維生素參與構成各種酶的活性基團的成分，沒有它們，酶便沒有活性，代謝活動將無法進行。比如，泛酸可以在細胞內轉變成�；�載體蛋白和輔酶（如輔酶A），參與糖類、脂類和蛋白質代謝中的催化反應；維生素B12則在細胞內參與葉酸的合成和脂肪酸的合成等。不同配方的細胞培養(yǎng)基中維生素的濃度有較大差異。
（5）無機鹽
無機鹽是細胞維持生命活動所不可缺少的營養(yǎng)成分，主要有Na+、K+、Ca2+、Mg2+、Cl－、PO43-、SO42-、HCO3－等，主要作用為維持細胞培養(yǎng)液滲透壓平衡，參與細胞的代謝活動。此外，通過提供鈉，K+和Ca2+，幫助細胞調節(jié)細胞膜功能。Na+是細胞外液中最主要的陽離子，對維持滲透壓的恒定有決定性的作用，還與Cl－共同參與生物電活動、維持水平衡和酸堿平衡等。K+主要分布在細胞內液，對于激活某些酶是必需的，并在調節(jié)細胞內環(huán)境的酸堿平衡上也有極重要意義。Ca2+和Mg2+主要參與信號傳導、能量代謝、脂肪酸合成、核糖體穩(wěn)定和蛋白質合成等多種生理作用。PO43－、SO42－、HCO3－是基質所需陰離子，同時是細胞內電荷的調節(jié)者。磷對于細胞的生長、代謝和調控都有重要的作用，含磷的化合物如核酸、磷脂、蛋白質是構成細胞的主要成分，ATP、ADP是能量生成、存儲和利用的不可或缺的化合物。
此外，微量元素如鐵、鈷、鎳、硒、碘、銅、鋅、錳、鉻、鉬、氟等對于細胞生長代謝和產物合成都有促進作用。
（6）其他添加成分
在低血清、無血清細胞培養(yǎng)基中，為滿足細胞生長增殖需要，常常添加一些成份：蛋白質、多肽、核苷、嘌呤、檸檬酸循環(huán)的中間產物、脂類、及一些血清替代因子等。其中蛋白質具有重要的作用，動物細胞對許多物質（難溶于水的離子或脂類物質）的攝取需要借助蛋白質的傳遞作用，如白蛋白、傳遞蛋白、貼壁蛋白等能夠攜帶脂肪酸、激素、礦物質等促進細胞生長。轉鐵蛋白是一種重要的傳遞蛋白，能夠結合鐵，促進細胞對鐵離子的吸收，并具有解毒作用，其促生長作用可能與其具有生長因子的功能有關。胰島素可促進細胞對葡萄糖和氨基酸的利用，商業(yè)化中一些生長因子以重組蛋白形式添加到培養(yǎng)基中，主要用來刺激細胞增殖，并可促進糖元和脂肪酸的合成。乙醇胺是一種重要的刺激細胞生長的化合物，是腦磷酸的合成前提。
（7）保護劑
細胞保護劑是保護細胞免受滲透壓變化、剪切力、氧化及氣泡作用等引起的損傷的物質。在使用生物反應器培養(yǎng)動物細胞時，細胞易被機械攪拌和通氣鼓泡產生的流體剪切力和氣泡作用所傷害甚至破損死亡。為降低這種損傷，除優(yōu)化生物反應器結構和生產工藝外，可在細胞培養(yǎng)液中添加一些保護劑。其主要是通過改變細胞培養(yǎng)基物性或是對細胞具有保護作用的物質，常用的種類有血清、白蛋白、聚乙二醇（PEG）、非離子性表面活性劑PluronicF68或是其他一些高分子聚合物等。
（8）pH值
動物細胞大多數(shù)需要輕微的堿性條件，適宜pH在7.2～7.4之間。細胞培養(yǎng)基的pH值通常需經校正的pH計來測定。在細胞生長過程中，隨細胞數(shù)量的增多和代謝活動的加強，二氧化碳不斷被釋放，培養(yǎng)液變酸，pH值發(fā)生變化。酚紅是細胞培養(yǎng)基中最常用的pH指示劑，但依靠細胞培養(yǎng)基中的酚紅等pH指示劑進行判斷，需要實驗員的經驗積累，存在較大的主觀性。實際上，個性化細胞培養(yǎng)基或是無血清細胞培養(yǎng)基中酚紅含量較少或是不含酚紅，只能通過pH計或者pH電極進行pH值的檢測，結果更為準確可靠。
（9）緩沖能力/CO2
細胞培養(yǎng)基應具有一定的緩沖能力。細胞培養(yǎng)過程中造成細胞培養(yǎng)液pH波動的主要物質是細胞代謝產生的CO2。在封閉式培養(yǎng)過程中CO2與水結合產生碳酸，細胞培養(yǎng)液pH很快下降；打開培養(yǎng)器具時CO2逸出則會引起pH升高。細胞培養(yǎng)基通常采用NaHCO3-CO2緩沖系統(tǒng)，按下列化學反應方程式調節(jié)細胞培養(yǎng)基的pH值：
H2O+CO2 →H2CO3 ⇌H++HCO3－
NaHCO3 ⇌Na+ +HCO3－
此外，還有緩沖能力較高的磷酸鹽緩沖系統(tǒng)。但碳酸鹽緩沖系統(tǒng)的細胞毒性小、成本低，在細胞培養(yǎng)中應用得更為廣泛。另一種較為常用的緩沖液是HEPES（羥乙基哌嗪乙硫磺酸）液，它是一種非離子兩性緩沖液，在pH7.0~7.2范圍內具有較好的緩沖能力。高濃度的HEPES可能對細胞有毒性作用，細胞培養(yǎng)時HEPES的添加濃度一般為10～25mmol/L。
（10）溫度
溫度對細胞培養(yǎng)基有較大的影響，溫度過高可引起營養(yǎng)成份的降解或破壞，細胞培養(yǎng)基的pH、離子強度和電解常數(shù)pKa也可能受到影響。如細胞培養(yǎng)液中的谷氨酰胺，在高溫條件下降解的速度較快，如35℃貯存時，放置3天降解25%左右，在4℃貯存3周降解約20%。
（11）粘滯性及表面張力
含血清細胞培養(yǎng)液的粘滯性主要是由血清引起的，在轉瓶培養(yǎng)貼壁細胞時，培養(yǎng)液的粘滯性對細胞生長沒有多大影響；但在生物反應器懸浮培養(yǎng)細胞時，細胞培養(yǎng)液的粘滯性則直接影響攪拌轉速控制及攪拌剪切力對細胞造成的損傷程度。
表面張力對細胞培養(yǎng)有較大的作用，尤其在利用生物反應器進行懸浮培養(yǎng)時，攪拌和通氣都會引起泡沫的產生。對于含血清培養(yǎng)液，由于血清中多種蛋白的存在，攪拌時產生的氣泡較多，氣泡的上升運動對細胞的損傷程度還有爭議，但氣泡的破裂對細胞有明顯的損傷作用。為降低這種損傷，可通過在細胞培養(yǎng)基中添加一些保護劑，降低細胞-氣體和細胞-液體的表面張力，減少氣泡的形成。
（12）不同細胞培養(yǎng)基的除菌方式及注意事項
細胞培養(yǎng)基滅菌的方式分為高壓滅菌和膜過濾除菌，不同的培養(yǎng)基由于其營養(yǎng)成份不同，滅菌方式也可能不同。
①高壓滅菌
某些培養(yǎng)基（如MEM）可進行高壓滅菌，這類培養(yǎng)基一般不含有L-谷氨酰胺和碳酸氫鈉，一般是在培養(yǎng)基高壓滅菌后才加入。另外可用耐高壓的谷氨酸鹽（如L-丙氨酰-L-谷氨酰胺）代替L-谷氨酰胺�？筛邏簻缇�的培養(yǎng)基在121℃、15psi，15分鐘的條件下完全可達到滅菌效果及營養(yǎng)成分的最小損失，不需將滅菌時間延長。
②膜過濾除菌
絕大多數(shù)細胞培養(yǎng)基不適宜高壓滅菌，因培養(yǎng)液中常含有維生素、蛋白質、多肽、生長因子等物質，這些物質在高溫或射線照射下易發(fā)生變性或失去功能，因而上述液體多采用過濾消毒以除去細菌�？晒┻^濾滅菌使用的濾膜很多，其材料多為polyethersulphone（PES）、尼龍、多聚碳酸鹽、醋酸纖維素、硝酸纖維素、PTFE、陶瓷等。膜過濾除菌是當前較為常用及便捷的一種方法，常采用0.2μm孔徑的濾膜，部分采用0.1μm孔徑。與高壓過濾方式相比，濾膜具有使用期限且價格較高，但對細胞培養(yǎng)基的營養(yǎng)成份破壞性較小。
8、細胞培養(yǎng)基中重要的幾種添加成份
（1）D-葡萄糖（D-Glucose）
作用：細胞生長所需的主要能量來源。
①最初的DMEM中，葡萄糖濃度為1g/L，現(xiàn)在稱其為低糖型DMEM，適合培養(yǎng)代謝作用較慢、依賴性貼壁細胞的哺乳動物細胞。
②高糖型DMEM中的葡萄糖濃度為4.5g/L，普遍應用于生長快、粘附性低的細胞、雜交瘤的骨髓瘤細胞、克隆細胞、DNA轉染的轉化細胞、原代病毒宿主細胞、單一細胞的培養(yǎng)以及疫苗的生產，例如利用CHO細胞表達EPO和生產乙肝疫苗。
③使用無糖培養(yǎng)基的主要目的是，通過控制細胞的能量來源，研究細胞的代謝過程或葡萄糖利用效率。
（2）L-谷氨酰胺（L-glutamine）
作用：L-谷氨酰胺是一種氨基酸，細胞的重要能量來源，參與蛋白質的合成，也為合成核酸提供碳源。
存在的問題：
①L-谷氨酰胺不穩(wěn)定，在中性的水溶液中會自發(fā)降解。
②降解產物氨對細胞有毒性。
③對氨敏感的細胞（如干細胞和原代細胞等）或培養(yǎng)環(huán)境（高密度反應器，無補料的長期培養(yǎng)）不推薦含L-谷氨酰胺的培養(yǎng)基。
解決方案：
①選擇不含谷氨酰胺的培養(yǎng)基，使用前自行添加L-谷氨酰胺。
②谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定，4℃下放置1周可分解50%，使用中最好單獨配制，置-20℃冰箱中保存，使用前加入細胞培養(yǎng)液中。
（3）丙酮酸鈉（Sodiumpyruvate）
作用：能量來源
①丙酮酸鈉可以作為細胞培養(yǎng)中的替代碳源。
②葡萄糖不足的時候，細胞可以代謝丙酮酸鈉。
③保證細胞更好地生長。
④非必需組分。
（4）HEPES
作用：pH緩沖劑。
①是一種氫離子緩沖劑，其作用不依賴于二氧化碳。
②在一定范圍內對細胞無毒性作用，能較長時間控制恒定的pH范圍，保證細胞良好生長。
③部分細胞對酸堿度的變化非常敏感，建議使用含有HEPES的培養(yǎng)基。
④添加后價格相對較高，非必需。
（5）酚紅（Phenolred）
作用：pH值指示劑，pH值低時培養(yǎng)基呈黃色，pH值高時培養(yǎng)基呈紫色，pH值7.2～7.4時為紅色，最適合細胞培養(yǎng)。
①在一些無血清培養(yǎng)基的配方中酚紅會干擾鈉-鉀平衡培養(yǎng)，干細胞或細胞克隆時傾向于不加酚紅。
②酚紅可以模擬固醇類激素的作用（特別是雌激素），在培養(yǎng)雌激素敏感的細胞（如乳腺組織）時，建議使用不含酚紅的培養(yǎng)基。
③酚紅的顏色會對流式細胞分析產生一定的干擾，不建議使用含酚紅的培養(yǎng)基制備細胞樣品。
（6）碳酸氫鈉（Sodiumbicarbonate）
作用：pH緩沖劑。
①pH6.8-7.8為細胞生長的最佳pH條件，多數(shù)培養(yǎng)基利用碳酸氫鈉進行緩沖。
②碳酸氫鈉的緩沖需要二氧化碳。高碳酸氫鈉(1.5-3.7g/L)需要5-10%二氧化碳；低碳酸氫鈉(0.35g/L)不需要二氧化碳培養(yǎng)箱。
③干粉培養(yǎng)基需要在配制時單獨添加碳酸氫鈉。