細胞因子是由免疫細胞(如單核、巨噬細胞、T細胞、B細胞、NK細胞等)和某些非免疫細胞(內(nèi)皮細胞、表皮細胞、纖維母細胞等)經(jīng)刺激而合成、分泌的一類具有廣泛生物學活性的小分子蛋白質。其作用是通過結合相應受體調節(jié)細胞生長、分化和效應,調控免疫應答。細胞因子,是細胞分化和行使功能時的產(chǎn)物,相當于人體內(nèi)各類細胞間相互交流的“信使”。它們被廣泛地應用于醫(yī)學診斷、抗癌治療、免疫調節(jié)、以及自身免疫等多種領域。
一、常見細胞因子
細胞因子可分為白細胞介素(interleukin, IL)、干擾素 (interferon, IFN)、腫 瘤 壞 死 因 子 (tumornecrosisfactor,TNF)、集落刺激因子(colony stimulating factor, CSF)、生長因子、趨化性細胞因子等。眾多的細胞因子在體內(nèi)通過旁分泌、自分泌或內(nèi)分泌等方式發(fā)揮作用,同時具有多效性、重疊性、拮抗性、協(xié)同性等多種生理特性,從而形成較復雜的細胞因子調節(jié)網(wǎng)絡,參與人體多種重要的生理功能。
二、常見細胞因子檢測方法
1、ELISA測定
酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)指將可溶性的抗原或抗體結合到聚苯乙烯等固相載體上,利用抗原抗體特異性結合進行免疫反應的定性和定量檢測方法。
特點:穩(wěn)定性好、提高檢出率、分子量大,操作簡單、快速、敏感性高、特異性強、實驗設備要求簡單、應用范圍廣泛、無放射性污染、能定性及半微量、微量、超微量定量分析,是目前應用最廣,發(fā)展最快的酶免疫學技術方法。
2、CBA測定
Cytometric Bead Array(CBA)是指細胞因子微球檢測技術。即微量樣本多指標流式蛋白定量技術是一個基于流式細胞檢測系統(tǒng)的多重蛋白定量檢測方法,它能夠同時對單個樣品中的多個指標進行檢測。是一種基于流式細胞檢測系統(tǒng)的多重蛋白定量檢測方法,它能夠同時對單個樣品中的多個指標進行檢測。
特點:樣本用量少,多指標檢測;操作方便,節(jié)省時間;同一樣本同時檢測,誤差小,精密度高;標準曲線自動測定,專用軟件自動計算,檢測范圍寬,靈敏度高;無酶-底物背景干擾。
3、FCM測定
流式細胞術是一種生物學技術,用于對懸浮于流體中的微小顆粒進行計數(shù)和分選。這種技術可以用來對流過光學或電子檢測器的一個個細胞進行連續(xù)的多種參數(shù)分析。流式細胞術(Flow CytoMetry,F(xiàn)CM)是對懸液中的單細胞或其他生物粒子,通過檢測標記的熒光信號,實現(xiàn)高速、逐一的細胞定量分析和分選的技術。
特點:可以檢測依托流式平臺檢測同時檢測多指標。
4、RT-PCR測定
細胞因子的mRNA壽命短且拷貝數(shù)低,因此難以在小量樣本中進行檢測。RT-PCR是一種能檢測細胞內(nèi)低豐度特異RNA的方法,其原理是首先以RNA為模板,在逆轉錄酶的催化下,合成與RNA互補的cDNA。然后以cDNA為模板,用PCR技術對靶序列進行擴增,使微量細胞因子的RNA經(jīng)放大后檢出。RT-PCR能檢出單個細胞中少于10個拷貝的特異RNA,如同時放大內(nèi)參照物(如β-Actin),即可對RT-PCR檢出的細胞因子mRNA進行定量。