實驗室獲取高品質(zhì)血清方法指引
血清是由血漿去除纖維蛋白原而形成的一種很復雜的混合物，指血液凝固后，在血漿中除去纖維蛋白原及某些凝血因子后分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白原已被除去的血漿。其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養(yǎng)條件不同而異。血清是血漿中不含纖維蛋白原的膠狀液體,具有維持血液的正常粘度、酸堿度、滲透壓等作用。
血清的質(zhì)量標準：
1. 內(nèi)毒素標準為不高于5EU/ml
2. 總蛋白含量胎牛血清一般范圍是30-40mg/ml，數(shù)值偏高偏低都會影響實驗的正常進行
3. 血紅蛋白標準為不高于20mg/dl
4. pH。國產(chǎn)血清、大多高于7.5，進口胎牛血清，大多低于7.5，根據(jù)PH的高低可用來初步鑒別血清的來源
5. 微生物。包括細菌、霉菌、支原體、噬菌體、各類病原性病毒等，大多都能清除。大腸桿菌噬菌體無法過濾，很難徹底清除，但對血清質(zhì)量影響不大。病原性病毒，在國產(chǎn)血清中幾乎90%以上都存在，是影響國產(chǎn)血清質(zhì)量的重要原因之一。
在實際篩選時，主要從血清外觀和實驗操作時細胞的生長狀態(tài)進行。
一、 從外觀上：
1. 顏色：根據(jù)血紅蛋白含量的不同，胎牛血清可表現(xiàn)出黃色或紅色，這個指標的意義在于能體現(xiàn)出采血過程的嚴謹規(guī)范程度。胎牛血清或多或少總有點溶血，因為胎牛血清凝血功能差，紅細胞容易破裂；
2. 澄清度：高質(zhì)量的胎牛血清由于蛋白和脂類等物質(zhì)含量低，表現(xiàn)為稀薄、清淡；
3. 血清沉淀：血清中的沉淀是由纖維蛋白的凝聚產(chǎn)生，對血清質(zhì)量沒有影響，沉淀的產(chǎn)生原因跟加工生產(chǎn)方式、是否反復凍融密切相關，在實驗操作中可能會對細胞觀察產(chǎn)生影響。
二、從性能上：
1. 細胞形態(tài)，在進行血清篩選時首先觀察細胞的生長形態(tài)是否產(chǎn)生明顯變化，以及觀察貼壁細胞的貼壁情況，細胞在不同血清培養(yǎng)中可能會出現(xiàn)形態(tài)上的差異；
2. 倍增時間，一般情況下會選擇倍增時間短的血清，值得注意的是血清的影響會傳至5代，在進行測試時，最好培養(yǎng)五代后進行計倍增時間的計算；
3. 克隆形成率，測試時一般選50、100、200個細胞進行平板克隆測試，平均5d左右換一次液，兩周后染色計數(shù)，對比克隆形成情況。
血清的質(zhì)量標準：
1. 內(nèi)毒素標準為不高于5EU/ml
2. 總蛋白含量胎牛血清一般范圍是30-40mg/ml，數(shù)值偏高偏低都會影響實驗的正常進行
3. 血紅蛋白標準為不高于20mg/dl
4. pH。國產(chǎn)血清、大多高于7.5，進口胎牛血清，大多低于7.5，根據(jù)PH的高低可用來初步鑒別血清的來源
5. 微生物。包括細菌、霉菌、支原體、噬菌體、各類病原性病毒等，大多都能清除。大腸桿菌噬菌體無法過濾，很難徹底清除，但對血清質(zhì)量影響不大。病原性病毒，在國產(chǎn)血清中幾乎90%以上都存在，是影響國產(chǎn)血清質(zhì)量的重要原因之一。
在實際篩選時，主要從血清外觀和實驗操作時細胞的生長狀態(tài)進行。
一、 從外觀上：
1. 顏色：根據(jù)血紅蛋白含量的不同，胎牛血清可表現(xiàn)出黃色或紅色，這個指標的意義在于能體現(xiàn)出采血過程的嚴謹規(guī)范程度。胎牛血清或多或少總有點溶血，因為胎牛血清凝血功能差，紅細胞容易破裂；
2. 澄清度：高質(zhì)量的胎牛血清由于蛋白和脂類等物質(zhì)含量低，表現(xiàn)為稀薄、清淡；
3. 血清沉淀：血清中的沉淀是由纖維蛋白的凝聚產(chǎn)生，對血清質(zhì)量沒有影響，沉淀的產(chǎn)生原因跟加工生產(chǎn)方式、是否反復凍融密切相關，在實驗操作中可能會對細胞觀察產(chǎn)生影響。
二、從性能上：
1. 細胞形態(tài)，在進行血清篩選時首先觀察細胞的生長形態(tài)是否產(chǎn)生明顯變化，以及觀察貼壁細胞的貼壁情況，細胞在不同血清培養(yǎng)中可能會出現(xiàn)形態(tài)上的差異；
2. 倍增時間，一般情況下會選擇倍增時間短的血清，值得注意的是血清的影響會傳至5代，在進行測試時，最好培養(yǎng)五代后進行計倍增時間的計算；
3. 克隆形成率，測試時一般選50、100、200個細胞進行平板克隆測試，平均5d左右換一次液，兩周后染色計數(shù)，對比克隆形成情況。
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