福爾馬林固定和石蠟包埋組織在生物醫(yī)學(xué)研究中被廣泛使用。但是從石蠟包埋組織中提取蛋白由于甲醛

會介導(dǎo)分子交聯(lián)而變得異常困難，傳統(tǒng)方法從石蠟包埋組織中提取蛋白需要使用有機(jī)溶劑重復(fù)脫蠟和水化，然后在高溫下或不可避免的超聲處理后提取蛋白。這些方法雖然在某些情況下是比較有效的，但是操作繁瑣，需要消耗 3-4 小時。本試劑盒提供了一種簡便，快速的方法，不需有機(jī)溶劑脫蠟。整個過程可以在不到 1 小時的時間內(nèi)完成，蛋白產(chǎn)量可以高達(dá) 1-2 毫克/毫升。

應(yīng)用：

提取的蛋白可用于 SDS-PAGE，WB，ELISA，免疫沉淀和蛋白質(zhì)組學(xué)研究。

試劑盒組分(20T):

1. 緩沖液 A 30ml

2. 緩沖液 B 10ml

3. 研磨粉 2g

4. 1.5ml 離心管 20 個

5. 塑料研磨棒 2 根

儲存：

常溫運(yùn)輸，室溫儲存。

所需附加材料

臺式離心機(jī)（最大離心力 14,000-16,000Xg）

加熱塊或者水浴鍋

產(chǎn)品重要信息
本試劑盒可用于從石蠟包埋組織或者未經(jīng)石蠟包埋但經(jīng)過福爾馬林固定的組織中提取總蛋白。

推薦將蛋白酶抑制劑在實(shí)驗前加在Buffer B中。研究蛋白磷酸化，磷酸酶抑制劑（如羅氏）應(yīng)在使用前加入Buffer B中。（請按照蛋白酶或磷酸酶抑制劑母液比例，例如母液是100x，添加時按照1：100添加，1ml緩沖液B添加10ul抑制劑）。蛋白濃度測定，推薦使用BCA試劑盒。

操作方法：

1. 用鋒利的刀片將組織切成薄片。去除組織切片中多余的石蠟，組織切片厚度大約在10-20um，大小應(yīng)在 30-60 平方毫米。取 4-5 個組織切片放入試劑盒提供的 1.5ml 離心管中。

2. 加入 0.7ml Buffer A，95℃加熱容塊或水浴中孵育 10 分鐘。孵育后在離心管還是熱的情況下，立刻 10,000Xg 室溫離心 5-10s。用 1ml 吸頭快速將所有上清吸干凈。再加入 0.7ml 的 Buffer A 到管中，如上描述再次重復(fù)加熱和離心操作一次。將上清去除干凈。

3. 在沉淀中加入 200ul 的 Buffer B，再加入 80mg 研磨粉到管底。

4. 用研磨杵大力反復(fù)扭轉(zhuǎn)勻漿 2-3min（研磨杵是重復(fù)使用的，可以用水洗干凈用干面巾紙擦干即可）。蓋上蓋子，在加熱容塊上或水浴鍋里 90-95℃熱孵育 40 min 到 1h。熱孵育后，12,000Xg離心 10 min，將上清（提取的蛋白）轉(zhuǎn)移到一個新的離心管中，可以用 BCA 法測定蛋白濃度。蛋白可用于下游應(yīng)用或存儲于-80℃。

注意：Buffer B 的使用量請按照操作說明添加。它也可以根據(jù)樣品的量放大或者降低。如果蛋白濃度低可以提高樣品起始量。