血清是細(xì)胞培養(yǎng)的必要成分之一，胎牛/新生牛/小牛/成牛種類繁多，加上市場上各種品牌，讓細(xì)胞小白挑花了眼，小愛圍繞以下問題帶您一站式了解。

1.血清為何對細(xì)胞狀態(tài)影響如此之大？

2.血清到底如何挑選？

3.絮狀物、沉淀、過濾、滅活等使用常見問題？

4.細(xì)胞出現(xiàn)問題如何判斷是否與血清有關(guān)？

 

血清為何對細(xì)胞狀態(tài)影響如此之大？

血清中含有多種已知和未知的成分，主要包括：蛋白質(zhì)和多態(tài)、多種因子、氨基酸 、激素，其他微量元素及不確定成分。其中生長因子促進(jìn)細(xì)胞增值，附著因子促進(jìn)細(xì)胞貼壁并具有抗胰酶活性，各種蛋白質(zhì)可提供細(xì)胞生長所必需的營養(yǎng)物質(zhì)，礦物質(zhì)、脂類及激素也可以結(jié)合于血清的蛋白質(zhì)中，由此可見血清在細(xì)胞培養(yǎng)過程中十分關(guān)鍵，其本身存在多種未知成分，采血時(shí)間差異，批次之間差異等，綜合決定了血清對細(xì)胞狀態(tài)的影響程度。
 

根據(jù)動(dòng)物來源不同，血清可分為馬血清、牛血清、豬血清，還有羊、雞、兔等動(dòng)物來源的血清，根據(jù)采血時(shí)間、血緣品質(zhì)又分為不同類別，加之不同工藝的加工，市面上可見的血清種類繁多。

 

通常馬血清用于神經(jīng)細(xì)胞的培養(yǎng)，豬血清用于疫苗生產(chǎn)，新生牛作為乳制品產(chǎn)業(yè)中的副產(chǎn)品，其血清產(chǎn)量更高、效益更好，適用細(xì)胞范圍也更廣。
 

為什么胎牛血清比新生牛血清貴？隨著胎齡的增長，補(bǔ)體系統(tǒng)逐漸發(fā)育，各種生長因子逐漸減少，進(jìn)食后的小牛血清中IgG含量增多，使血清隨著采血時(shí)間后移質(zhì)量相對下降，而且每頭胎牛僅能獲得約500ml血清，種種因素使得胎牛血清成為細(xì)胞培養(yǎng)的的首選血清，價(jià)格也相對更加昂貴。為了滿足不同實(shí)驗(yàn)需求，產(chǎn)生了適合外泌體研究的去外泌體血清，適合脈沖示蹤實(shí)驗(yàn)的透析胎牛血清等等，而不同的生產(chǎn)工藝產(chǎn)生了特級(jí)、優(yōu)級(jí)、標(biāo)準(zhǔn)級(jí)血清。

 

牛血清根據(jù)采血時(shí)間不同分類表

類別	來源
胎牛血清	對孕期母牛腹腔穿刺獲取
新生牛血清	出生4-6h內(nèi)未進(jìn)食進(jìn)水的新生牛靜脈采血
小牛血清	出生后10-90d的小牛靜脈采血
成年牛血清	出生超過6個(gè)月的牛靜脈采血

 

判斷血清質(zhì)量的四個(gè)指標(biāo)：

依據(jù)《中國生物制品主要原輔料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)2000年版》

1.有害微生物，不能含有牛腹瀉病毒，不能被噬菌體、支原體、真菌污染。

2.內(nèi)毒素，不應(yīng)高于10 EU/ml.

3.總蛋白含量，3.5%~5%（w/V），過高可能是由于采血時(shí)間較晚，過低血清可能被人為稀釋。

4.血紅蛋白，從一定程度上反映了采集流程的規(guī)范程度。不應(yīng)高于0.02% (w/v).

此外還流傳著通過顏色判斷血清質(zhì)量的方法，小愛認(rèn)為不夠科學(xué)，血清顏色由是血紅蛋白（紅）和膽紅素（黃）決定，胎牛尚未完全發(fā)育，因此其凝血功能不完善，所以采集血清時(shí)溶血不可避免，根據(jù)血紅蛋白是否超標(biāo)來判斷采血過程的規(guī)范性更為精準(zhǔn)。

 

絮狀物、沉淀、過濾、滅活等使用常見問題？

我們推薦大家養(yǎng)成先4℃解凍，室溫或37℃完全融解的方法，由于蛋白質(zhì)等干物質(zhì)的融解速度大于水這類溶劑，所以我們在血清融解過程中最好多次混勻，避免大量蛋白融于極少部分水，而產(chǎn)生蛋白沉淀。
 

如果融解血清時(shí)出現(xiàn)沉淀也不要著急，產(chǎn)生的沉淀多為脂蛋白和纖維蛋白，血清中這些物質(zhì)的含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于細(xì)胞生長需求，所以并不影響后續(xù)細(xì)胞培養(yǎng)效果，血清打開后分裝使用，避免反復(fù)凍融可以降低出現(xiàn)沉淀的概率，遇到血清沉淀的情況我們可以嘗試延長融解時(shí)間或者離心去除沉淀。

 

血清融解產(chǎn)生的沉淀（圖片來源于網(wǎng)絡(luò)，僅供學(xué)習(xí)使用）

 

此外血清在生產(chǎn)時(shí)經(jīng)過多次過濾除菌，有些血清還經(jīng)過輻照滅菌，所以在一般無需過濾。熱滅活目的是為了去除血清中補(bǔ)體等對熱敏感的物質(zhì)，但是在胎牛血清中對補(bǔ)體的滅活則明顯沒有必要，補(bǔ)體的主要成分C3在胎牛血清中則幾乎不能檢出，其他的補(bǔ)體成分也很少。

 

細(xì)胞出現(xiàn)問題如何判斷是否與血清有關(guān)？

主要看是否更換了新批次的血清，不同批次的血清成分可能有一定程度的改變，所以推薦購買血清時(shí)多囤幾瓶同批次的，更換批次后，一定要注意觀察細(xì)胞狀態(tài)。

血清批間差會(huì)造成細(xì)胞哪些改變呢？

主要表現(xiàn)為增長變慢，細(xì)胞邊界不清，形態(tài)改變，空泡化，貼壁能力減弱，漂浮，凋亡增多等。

 血清批間差造成的細(xì)胞聚團(tuán)、形態(tài)改變、空泡化
 

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