近年來，腫瘤免疫療法在癌癥治療中非常火熱。腫瘤免疫學(xué)治療的目的是激發(fā)或調(diào)動機體的免疫系統(tǒng)，增強腫瘤微環(huán)境抗腫瘤免疫力，從而控制和殺傷腫瘤細(xì)胞。隨著免疫治療的興起也推動了腫瘤研究的發(fā)展，但是由于人源化體系的復(fù)雜性、免疫系統(tǒng)的部分或無效重組建等問題，致使免疫腫瘤模型面臨著巨大的挑戰(zhàn)，臨床上迫切需要能夠用于個體化驗證療效的體外模型。類器官的出現(xiàn)給腫瘤免疫治療提供了新的契機，然而，現(xiàn)有的類器官中缺乏免疫細(xì)胞限制了其發(fā)展。

小愛這次給大家介紹一下基本的腫瘤類器官免疫共培養(yǎng)方法，如下：

1、類器官準(zhǔn)備

1）提前一周，復(fù)蘇培養(yǎng)類器官至狀態(tài)良好；

2）取合適數(shù)量類器官，使用預(yù)冷PBS清洗數(shù)次，去除大部分基質(zhì)膠；

3）使用培養(yǎng)基重懸類器官。

2、PBMC分離和類器官共培養(yǎng)

1）外周血在無菌環(huán)境下，使用添加EDTA-K2的真空采血管采集，運輸保存；

2）將新鮮靜脈血與PBS緩沖液1：1稀釋，輕輕混勻待用；

3）添加4ml細(xì)胞分離液（abs930），緩慢加入靜脈血混合物8ml，靜置待用；

4）2000rpm離心20min，在此過程中升降速度降至1，避免產(chǎn)生細(xì)胞融合；

5）此時觀察到15ml離心管為4層，輕輕吸取第2層白色懸浮物于15ml離心管，混勻待用；

6）1500rpm離心10min，在此過程中升降速度降至1，避免產(chǎn)生細(xì)胞融合，棄上清；

7）添加適量T細(xì)胞無血清基礎(chǔ)培養(yǎng)基靜置培養(yǎng)觀察。T細(xì)胞無血清完全培養(yǎng)基的配置：向T細(xì)胞無血清基礎(chǔ)培養(yǎng)基里添加IL-2（abs05543）200-500單位/ml（刺激T細(xì)胞生長與增殖），CD3/CD28磁珠（abs160019）3ug/ml（激活T細(xì)胞）；

8）使用T細(xì)胞無血清完全培養(yǎng)基，懸浮調(diào)整至合適濃度，96孔板，每孔約加入5*105 活T細(xì)胞，100ul體積；

9）重懸類器官混合液，分別加入等量的樣至96孔板中，至總體積200ul。

3、培養(yǎng)觀察

1）D0觀察記錄類器官和T細(xì)胞狀態(tài)；

2）37℃，5% CO2條件下培養(yǎng)，每日連續(xù)觀察；

3）D3吸出100ul培養(yǎng)上清，加入100ul新培養(yǎng)基，同時加入（處理抗體或藥物）使至終濃度100nM（如果D3已出現(xiàn)顯著差別，則記錄大視野明場形態(tài)，終止實驗）；

4）觀察至實驗組間差異顯著，拍照記錄大視野細(xì)胞明場形態(tài)；

5）細(xì)胞上清保存用于后續(xù)檢測。

此圖為我司做得免疫共培養(yǎng)實驗，從上圖可明顯看出B藥物作用下，T細(xì)胞有明顯的殺傷效果。