本試劑盒可用于細(xì)胞因子等誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖檢測，也可以用于抗癌藥物等對(duì)細(xì)胞有毒試劑誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性檢測，或一些藥物誘導(dǎo)的細(xì)胞生長抑制檢測。
 

使用注意事項(xiàng)

Q：為什么測出的吸光度數(shù)值較低？

1.細(xì)胞數(shù)量過低�？梢赃m當(dāng)增加細(xì)胞待測數(shù)量。

2.染色難度大，建議增加CCK-8孵育時(shí)間。

Q：為什么數(shù)據(jù)重復(fù)性差？

1.孔板最外圈試劑容易揮發(fā)，建議最外一圈的孔只加培養(yǎng)基，不作為測定孔用。

可以使用NEST的 Edge96孔板避免。
 

Edge培養(yǎng)板

2.CCK-8沾壁，建議加入CCK-8后，輕輕敲擊培養(yǎng)板以幫助混勻。

3.細(xì)胞數(shù)量過多或過少，建議預(yù)先在1000-100000個(gè)/孔范圍內(nèi)摸索條件。

4.孔內(nèi)氣泡干擾酶標(biāo)儀檢測，檢測前需確保每個(gè)孔內(nèi)無氣泡。

Q：在做細(xì)胞的加藥實(shí)驗(yàn)時(shí),藥物對(duì)CCK-8測定是否有影響？

1.注意如果藥物具有還原性(如維生素C),會(huì)和CCK-8發(fā)生顯色反應(yīng),增加吸光度。

2.藥物中的金屬對(duì)CCK-8顯色有影響:當(dāng)終濃度為1mM的氯化亞鉛、氧化鐵、硫酸銅會(huì)抑制5%,15%, 90%的顯色反應(yīng),使靈敏度降級(jí)。如果終濃度是10mM的話，將會(huì)100%抑制。

解決辦法:首先要確認(rèn)藥物是否有吸收,在含有藥物的培養(yǎng)基中加入CCK-8,測定450nm的吸光度,如果它的吸光度比不含藥物的培養(yǎng)基(加CCK-8)的吸光度高,則證明藥物有影響,可在加CCK-8之前更換培養(yǎng)基,去掉藥物的影響。

3.由于培養(yǎng)基中可能含有氧化還原反應(yīng)的物質(zhì),在正式實(shí)驗(yàn)之前,建議使用一個(gè)孔作一下檢測,有必要先確認(rèn)培養(yǎng)基和CCK-8是否反應(yīng)，一般正常的OD值應(yīng)該在0.4以下。

Q：可否采用CCK-8法進(jìn)行藥物的IC50檢測？

可以,將細(xì)胞培養(yǎng)后按照不同濃度的藥物處理一定時(shí)間后進(jìn)行CCK-8檢測,根據(jù)吸光度繪制曲線,計(jì)算該藥物抑制細(xì)胞數(shù)量一半時(shí)的濃度(IC50)。

Q：CCK-8對(duì)于不同的細(xì)胞,靈敏度是否一樣？

不一樣,懸浮細(xì)胞較貼壁細(xì)胞難染色。對(duì)于貼壁細(xì)胞,一般加入CCK-8培養(yǎng)1-4小時(shí)吸光度已經(jīng)很高,但對(duì)于懸浮細(xì)胞則可能吸光度較低,可以通過延長CCK-8的加入時(shí)間或增加細(xì)胞數(shù)量來解決。

Q：若是暫不檢測OD值，該如何處理？

若暫時(shí)不測定 OD 值，可以向每孔中加入 10μL 0.1 M 的 HCl 溶液或者 1% w/v SDS 溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24 小時(shí)內(nèi)測定，吸光度不會(huì)發(fā)生變化。

Q：用CCK-8測細(xì)胞活力時(shí)每次都要做標(biāo)準(zhǔn)曲線嗎？

建議每次做，雖然細(xì)胞是一樣的，但是細(xì)胞的狀態(tài)不一定一樣。對(duì)于狀態(tài)不一樣的細(xì)胞，建議每次做標(biāo)準(zhǔn)曲線。