人類永生化表皮細胞HaCaT培養(yǎng)攻略
HaCaT細胞是人類永生化表皮細胞，由角質(zhì)形成細胞培育而來的，保留了角質(zhì)形成細胞分化能力，是非腫瘤來源的人正常皮膚永生化角質(zhì)形成細胞株，與正常人角質(zhì)形成細胞分化特性相似，可以繁殖150代以上，但不是腫瘤細胞，不具有腫瘤特性。
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細胞名稱 |
HaCaT（人永生化角質(zhì)形成細胞） |
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細胞來源 |
一位62歲患有黑色素瘤男性的病灶外圍正常皮膚 |
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形態(tài) |
上皮細胞樣 |
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生長特性 |
貼壁生長 |
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營養(yǎng)體系 |
89%MEM+10%胎牛血清優(yōu)級+1%雙抗)+0.2%牛腦垂體提取物 |
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傳代 |
1:3—1:5，傳代周期2-3天 |
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凍存 |
無血清細胞凍存液plus/ 90%完全培養(yǎng)液+10%DMSO |
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應(yīng)用 |
皮膚生物學(xué)和分化研究 |
該細胞較難消化，胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%) ，含酚紅消化5min作用，有時可能高達10min，主要由于細胞不同分化程度和融合度而異。注意消化前一定要用PBS清洗細胞2-3次，鋪板時一定要均勻，因為HaCat成片生長，鋪板不勻會存在局部生長過密難以消化，生長稀疏部分容易消化過度的情況。
圖a 低Ca2+條件下HaCat細胞基礎(chǔ)狀態(tài)和圖b高Ca2+條件下HaCat細胞分化狀態(tài)
10%FBS培養(yǎng)體系中的Ca2+足以誘導(dǎo)該細胞分化，也就是說，正常培養(yǎng)體系下，該細胞會逐漸分化，分化前細胞近紡錘形，排列較松散，分化后細胞向立方體發(fā)展，排列緊密，呈片狀生長。
低鈣離子條件下，HaCat增殖更快，K14的表達僅限于表皮基底層，而K10和總合蛋白的存在表明表型分化程度更高。通過免疫熒光實驗證實了HaCat細胞分化表型的獲得，與第6天相比，分化標記K10在HaCaT細胞中的表達在第14天顯著增加，幾乎100%的細胞是陽性的，這可能和細胞密度有關(guān)。
牛腦垂體物常用作無血清細胞培養(yǎng)的生長補充劑，可促進上皮細胞、內(nèi)皮細胞和黑色素細胞增殖，廣泛用作各種上皮細胞和黑色素細胞培養(yǎng)中的補充劑。此外，其具有抗氧化能力，可對抗過氧化氫誘導(dǎo)的細胞壞死，蛋白質(zhì)氧化，膜破碎和DNA損傷。
