小鼠肺上皮細(xì)胞 TC-1培養(yǎng)說明書
 

培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是運(yùn)輸細(xì)胞的最好辦法。收到細(xì)胞用 75%

酒精噴灑整個(gè)細(xì)胞瓶，消毒后放到超凈臺(tái)內(nèi)嚴(yán)格無菌操作，將細(xì)胞瓶放入 37℃、5%CO2的培

養(yǎng)箱中靜置 3-4 小時(shí)以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)后再做處理。顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行

不同倍數(shù)拍照保存（最好 40x,100x,200x 各一張），前三天照片是重要售后依據(jù)，不提供照

片默認(rèn)收到狀態(tài)良好。（注意密封培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱時(shí)要將蓋子擰松，傳代后建議一瓶用

原瓶的完全培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的完全培養(yǎng)基，以便進(jìn)行對(duì)比培養(yǎng)）

三、細(xì)胞培養(yǎng)步驟

a、細(xì)胞傳代：
如果未超過 80%匯合度時(shí)，將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中，留 5ml 完全培養(yǎng)基，放入 37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；如果細(xì)胞密度超 80%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)，傳代具體步驟如下：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1-2ml 至培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培養(yǎng)箱中消化 1-2min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加 5ml 以上完全培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細(xì)胞，使之完全脫落后吸出，然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，在 1000RPM 條件下離心 5 分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 完全培養(yǎng)基重懸。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 的比例進(jìn)行分瓶傳代（兩個(gè) T25 瓶），補(bǔ)充新的完全培養(yǎng)基至 5-8ml/瓶，最后放入到 37℃、5%CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

1、細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時(shí)，棄 T25 培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細(xì)胞一次；

2、添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入 5ml 完全培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3、 棄上清，沉淀細(xì)胞加入 1ml 的雅吉生物無血清凍存液（貨號(hào)：C7001），混勻后加入凍存管中。

細(xì)胞名稱

小鼠肺上皮細(xì)胞 TC-1

貼壁生長(zhǎng)

無血清凍存液（貨號(hào)：C7001）

1640+10%FBS+1%雙抗

第一次建議 1:2 傳代

2 天換液

備注

用無菌離心管收集瓶子培養(yǎng)基，留作過渡對(duì)比培養(yǎng)

如果對(duì)比培養(yǎng)效果不好，建議直接購(gòu)買我們的完全培養(yǎng)基NO.YS1054C

4、 將凍存細(xì)胞直接放入-80℃冰箱即可，如后期要將細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮罐中，則需在-80℃冰箱中存放 24 小時(shí)以上再轉(zhuǎn)入液氮罐中。

C、細(xì)胞復(fù)蘇：

1、從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意佩戴防護(hù)面具），快速將其置入 37℃水浴中解凍， 直至凍存管中無結(jié)晶，然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2、將凍存管中的細(xì)胞移至含 5ml 完全培養(yǎng)基的 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3、棄上清，沉淀用 5ml 完全培養(yǎng)基重懸，接種至 T25 培養(yǎng)瓶，放于 37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4、第二天，換用新鮮完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

四、注意事項(xiàng)：
有些細(xì)胞貼壁不牢，在運(yùn)輸過程中細(xì)胞容易脫落，這是正�，F(xiàn)象。如脫落較多可將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管，1000rpm 離心 5min，收集上清作過渡培養(yǎng)（后期對(duì)比培養(yǎng)），沉淀加入胰酶 1-2ml，輕輕吹打，重懸，消化 1-2 分鐘后，加 5ml 完全培養(yǎng)基終止反應(yīng)。再離心，棄上清，加 1-2ml 完全培養(yǎng)基重懸。然后按 1:2 比例進(jìn)行分瓶傳代（兩個(gè)T25），補(bǔ)充新的完全培養(yǎng)基至 5-8ml/瓶，最后放入 37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

五、售后條款：

1. 細(xì)胞運(yùn)輸途中遭遇的各種問題，細(xì)胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等，重發(fā)；

2. 細(xì)胞污染問題，請(qǐng)?jiān)谑盏疆a(chǎn)品 48 小時(shí)內(nèi)，給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，核實(shí)后重發(fā)；

3. 常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置 24 小時(shí)后，干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇后 24 小時(shí)后，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活，（需提供真實(shí)清晰的細(xì)胞狀態(tài)照片），重發(fā)；

4. 干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇后 24 小時(shí)后或常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置 4 小時(shí)候并且未開封，出現(xiàn)污染，重發(fā)；

5. 細(xì)胞活性問題，請(qǐng)?jiān)谑盏疆a(chǎn)品 7 天內(nèi)給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，用臺(tái)盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力，核實(shí)后予重發(fā)；

6. 細(xì)胞收到當(dāng)天以及第 2,3 天請(qǐng)拍照，3 天未告知的，視為產(chǎn)品合格。4-7 天內(nèi)出現(xiàn)問題有提供收到細(xì)胞前 3 天照片和細(xì)胞出現(xiàn)問題時(shí)照片以及細(xì)胞相關(guān)操作的詳細(xì)步驟的，并跟技術(shù)人員溝通的，由技術(shù)人員判定為我方責(zé)任的，重發(fā)。技術(shù)人員判定為雙方承擔(dān)責(zé)任的由雙方進(jìn)行協(xié)商處理或者按合同價(jià)的 50%收費(fèi)重發(fā)。

1. 客戶造成細(xì)胞污染，不重發(fā)；

2. 客戶不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；

3. 非本庫推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；

4. 細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供細(xì)胞培養(yǎng)前 3 天照片的，不重發(fā)；

5. 細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；

6. 細(xì)胞收到 2 天內(nèi)，未告知，不重發(fā)；

7. 視具體情況而定