我們辛辛苦苦養(yǎng)好的類器官，該如何做鑒定呢？通常是HE染色和免疫組化染色。今天小編帶大家了解一下類器官如何進(jìn)行包埋及HE染色。

 

一、類器官收集

1、類器官收集（例如24孔板，收集1-2孔類器官，大約200-500個(gè)類器官）；

2、4℃靜置 10min，離心棄去大部分上清。

 

二、瓊脂糖凹槽制備

 

1、稱量0.2至0.4g瓊脂糖，加入至燒杯或者小試劑瓶?jī)?nèi)；

2、加入10mL左右PBS；

3、微波爐高火融化，每隔5s暫停打開，觀察，重復(fù)數(shù)次至瓊脂糖融化完全；

4、取約200uL融化瓊脂糖，加入至600uL 1.5ml EP管內(nèi)（如下圖所示）；

5、在盛有瓊脂糖的1.5ml EP管內(nèi)插入一小0.5ml EP管，使瓊脂糖形成一圓尖底凹槽，室溫或者4℃冰箱靜置數(shù)分鐘，至瓊脂糖凝固，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)小0.5ml EP管，取出0.5ml EP管，可看到瓊脂糖內(nèi)形成一個(gè)深圓尖底槽；

6、吸取類器官沉淀置于凹槽底部，盡量包埋在中間位置；

7、加入PBS至高于瓊脂糖槽的邊緣。

 

三、類器官固定

 

四、類器官包埋

 

1、脫水：取出已凝固的含有類器官沉淀的瓊脂糖塊，在梯度乙醇中脫水，70%、80%、90%和95%乙醇各1h，100%乙醇30min，待其凝固；

2、融蠟：提前4h左右打開烘箱，65℃溶蠟；

3、透明：將脫水完成后的瓊脂糖塊轉(zhuǎn)移至組織包埋盒中（二甲苯處理前需一直浸泡在無水乙醇中），將包埋盒轉(zhuǎn)移至二甲苯中5min處理兩次；注：因二甲苯有毒性，需在通風(fēng)良好區(qū)域進(jìn)行操作，取出時(shí)盡量瀝盡殘留二甲苯；

4、浸蠟：透明化處理完成后立即轉(zhuǎn)入已經(jīng)融化的蠟缸中，60℃浸蠟2h后，更換新的蠟缸再次浸蠟2h；

5、包埋：包埋在冰盒上進(jìn)行，將融好的純蠟倒入蠟盒三分之一處，將瓊脂塊放置于中間位置，然后再滴蠟包埋直到倒?jié)M。待蠟塊完全凝固后，小心脫下模具。

 

五、類器官HE染色

 

1、石蠟切片脫蠟至水

依次將切片放入二甲苯I 10min；二甲苯Ⅱ10min；無水乙醇Ⅰ5min；無水乙醇Ⅱ5min；95%酒精5min；90%酒精5min；80%酒精5min；70%酒精5min；蒸餾水洗。

 

2、蘇木素染細(xì)胞核

切片入Harris蘇木素染3-8min，自來水洗。

 

3、伊紅染細(xì)胞質(zhì)

切片入伊紅染液中染色1-3min，自來水洗。

 

4、脫水封片

將切片依次放入95%酒精I(xiàn) 5min ；95%酒精I(xiàn)I 5min；無水乙醇Ⅰ5min ；無水乙醇Ⅱ5min ；二甲苯Ⅰ5min ；二甲苯Ⅱ5min中脫水透明，將切片從二甲苯拿出來稍晾干，中性樹膠封片。

 

5、顯微鏡鏡檢，圖像采集分析

 

六、類器官鑒定-HE染色結(jié)果（以肺癌為例）

人肺癌類器官HE染色