問：對于干燥過的昆蟲樣品，如蚊子，這種方法是否有效？

答：對于特別干燥或陳舊的樣品，你需要先將樣品均質(zhì)化后再進(jìn)行核酸提取，以獲得盡可能多的DNA。

 

問：這種方法能用于蜱蟲的提取嗎？

答：是的，《極地研究》在2015年發(fā)表了一項專注于蜱蟲傳播病原體的研究。這篇文章可以在我們的網(wǎng)站上找到。去年發(fā)表的另一項研究顯示，德克薩斯州的一個小組對大約200只蜱蟲進(jìn)行了采樣，并使用MicroGEM方法提取DNA來研究分子標(biāo)記，以幫助進(jìn)行物種鑒定。

 

問：我可以根據(jù)昆蟲的大小來增加和減少試劑嗎？

答：可以，如前面所示，我們有小組使用昆蟲的一部分，如蚊子腿，他們將試劑縮減到10ul。如果你想從一個特別大的樣品中提取，你可以很容易地放大到100ul 200ul。你只需將試劑移入一個較大的管子，如1.5ml的Eppendorf管，并使用1.5ml的恒溫混勻儀進(jìn)行加熱。擴(kuò)大和縮小試劑的規(guī)模是很重要的一點，因為TDE方法在提取過程中不會濃縮DNA。最終的濃度取決于樣品的質(zhì)量，也取決于起始試劑的體積，所以正確的起始體積可以確保你的DNA樣本有一個適當(dāng)?shù)臐舛取?br />
 

問：我該如何進(jìn)行均質(zhì)處理？

答：只需按照你正常的方法進(jìn)行均質(zhì)化。使用一個手持式均質(zhì)工具，你可以在MicroGEM試劑中研磨樣品。你也可以在液氮中冷凍樣品，然后將其磨碎。

需要考慮的是，我們的提取過程不能從混合液中去除下游的抑制劑。如果你使用的均質(zhì)化緩沖液含有可能抑制PCR或者測序的化學(xué)物質(zhì)，這些化學(xué)物質(zhì)會留在混合液中，影響你的進(jìn)一步分析。所以盡量不要在含有抑制PCR或測序的試劑中進(jìn)行均質(zhì)處理。

 

問：該提取物是否與所有PCR試劑兼容？

答：是的，它與我們測試過的所有試劑都兼容。

 

問：我們面臨的特殊挑戰(zhàn)是處理小甲蟲（鞘翅目）。我們使用蛋白酶K，但沒法讓它通過甲殼質(zhì)進(jìn)行消化。你們的酶是否能夠做到這一點？

答：由于我們的PrepGEM酶提取溫度高至75°C，所以我們對甲殼質(zhì)樣品有更好的裂解效果。一些客戶還使用昆蟲學(xué)針在每個甲蟲身體上打一個小孔，以幫助DNA的提取。