Annexin V-Cy5在檢測(cè)細(xì)胞中膜聯(lián)蛋白和磷脂酰絲氨酸結(jié)合活性上的應(yīng)用
Annexin V-Cy5標(biāo)記是美國(guó)AAT Bioquest研發(fā)的用于檢測(cè)細(xì)胞功能的探針，膜聯(lián)蛋白是鈣依賴性磷脂結(jié)合蛋白家族。跟著百螢一起來(lái)看看Annexin V-Cy5標(biāo)記是怎么工作的吧！
1. Annexin V-Cy5標(biāo)記簡(jiǎn)介和工作原理
細(xì)胞凋亡是細(xì)胞的基本特征之一，它在機(jī)體的胚胎發(fā)育、組織修復(fù)、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定和一些疾病發(fā)生過程等方面起著十分重要的作用。 在正常細(xì)胞中，磷脂酰絲氨酸（PS）只分布在細(xì)胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè)，而在細(xì)胞凋亡早期，細(xì)胞膜中的磷脂酰絲氨酸（PS）由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)。在體內(nèi)，巨噬細(xì)胞可以識(shí)別翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜表面的PS 從而將這些程序性死亡的細(xì)胞清除，因此凋亡過程中并不伴隨局部的炎癥反應(yīng)，而在細(xì)胞壞死的過程中則常常伴隨著炎癥反應(yīng)。 AnnexinⅤ是一種分子量為35-36kD的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能與細(xì)胞凋亡過程中翻轉(zhuǎn)到膜外的PS高親和力特異性結(jié)合。PS 外翻發(fā)生在細(xì)胞核破裂，DNA 片段化以及凋亡相關(guān)蛋白出現(xiàn)之前，這使得Annexin V 與PS 的結(jié)合成為凋亡早期的一種重要檢測(cè)標(biāo)志事件。
2.Annexin V-Cy5標(biāo)記參數(shù)
Ex(nm) 656
Em(nm) 670
分 子 量 ~36000
溶 劑 Water
存儲(chǔ)條件 在零下15度以下保存，避免光照
3.Annexin V-Cy5標(biāo)記特點(diǎn)
方便：可用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡檢測(cè)；
快速：1小時(shí)內(nèi)即可完成實(shí)驗(yàn)；
準(zhǔn)確：能準(zhǔn)確區(qū)分活細(xì)胞、凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞，并計(jì)數(shù)各群細(xì)胞的比例。
4.Annexin V-Cy5標(biāo)記數(shù)據(jù)分析
下圖是使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)膜聯(lián)蛋白V-mFluor Violet 450與磷脂酰絲氨酸在Jurkat細(xì)胞凋亡中的結(jié)合活性的實(shí)例。 在活的非凋亡細(xì)胞中，膜聯(lián)蛋白V-mFluor Violet 450檢測(cè)非誘導(dǎo)細(xì)胞中的先天性細(xì)胞凋亡，其通常為所有細(xì)胞的2-6％。 在凋亡細(xì)胞中，膜聯(lián)蛋白V-mFluor Violet 450與磷脂酰絲氨酸結(jié)合，磷脂酰絲氨酸位于細(xì)胞膜的外部小葉上，導(dǎo)致染色強(qiáng)度增加。
圖1.在Jurkat細(xì)胞中檢測(cè)膜聯(lián)蛋白VmFluor Violet 450和磷脂酰絲氨酸的結(jié)合活性。 將Jurkat細(xì)胞在37℃，5％CO2培養(yǎng)箱中不用（藍(lán)色）或用1μM星形孢菌素（紅色）處理5小時(shí)，然后用Annexin V-mFluor Violet 450染色30分鐘。 使用FACSCalibur（Becton Dickinson，San Jose，CA）流式細(xì)胞儀，使用紫外激光在Ex / Em = 405 / 450nm下測(cè)量膜聯(lián)蛋白V-mFluor Violet 450的熒光強(qiáng)度。
5.參考文獻(xiàn)
Resources-Application Notes Phenotypic and Epigenetic Mechanism of Action Determinations of Histone Methylase and Demethylase Inhibitors using Digital Widefield Microscopy
Authors: Brad Larson, Peter Banks
Journal: Experimental Biology (2017)
Targeted Magnetic Intra-Lysosomal Hyperthermia produces lysosomal reactive oxygen species and causes Caspase-1 dependent cell death
Authors: Pascal Clerc, Pauline Jeanjean, Nicolas Halalli, Michel Gougeon, Bernard Pipy, Julian Carrey, Daniel Fourmy, Véronique Gigoux
Journal: Journal of Controlled Release (2017)
1. Annexin V-Cy5標(biāo)記簡(jiǎn)介和工作原理
細(xì)胞凋亡是細(xì)胞的基本特征之一，它在機(jī)體的胚胎發(fā)育、組織修復(fù)、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定和一些疾病發(fā)生過程等方面起著十分重要的作用。 在正常細(xì)胞中，磷脂酰絲氨酸（PS）只分布在細(xì)胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè)，而在細(xì)胞凋亡早期，細(xì)胞膜中的磷脂酰絲氨酸（PS）由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)。在體內(nèi)，巨噬細(xì)胞可以識(shí)別翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜表面的PS 從而將這些程序性死亡的細(xì)胞清除，因此凋亡過程中并不伴隨局部的炎癥反應(yīng)，而在細(xì)胞壞死的過程中則常常伴隨著炎癥反應(yīng)。 AnnexinⅤ是一種分子量為35-36kD的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能與細(xì)胞凋亡過程中翻轉(zhuǎn)到膜外的PS高親和力特異性結(jié)合。PS 外翻發(fā)生在細(xì)胞核破裂，DNA 片段化以及凋亡相關(guān)蛋白出現(xiàn)之前，這使得Annexin V 與PS 的結(jié)合成為凋亡早期的一種重要檢測(cè)標(biāo)志事件。
2.Annexin V-Cy5標(biāo)記參數(shù)
Ex(nm) 656
Em(nm) 670
分 子 量 ~36000
溶 劑 Water
存儲(chǔ)條件 在零下15度以下保存，避免光照
3.Annexin V-Cy5標(biāo)記特點(diǎn)
方便：可用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡檢測(cè)；
快速：1小時(shí)內(nèi)即可完成實(shí)驗(yàn)；
準(zhǔn)確：能準(zhǔn)確區(qū)分活細(xì)胞、凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞，并計(jì)數(shù)各群細(xì)胞的比例。
4.Annexin V-Cy5標(biāo)記數(shù)據(jù)分析
下圖是使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)膜聯(lián)蛋白V-mFluor Violet 450與磷脂酰絲氨酸在Jurkat細(xì)胞凋亡中的結(jié)合活性的實(shí)例。 在活的非凋亡細(xì)胞中，膜聯(lián)蛋白V-mFluor Violet 450檢測(cè)非誘導(dǎo)細(xì)胞中的先天性細(xì)胞凋亡，其通常為所有細(xì)胞的2-6％。 在凋亡細(xì)胞中，膜聯(lián)蛋白V-mFluor Violet 450與磷脂酰絲氨酸結(jié)合，磷脂酰絲氨酸位于細(xì)胞膜的外部小葉上，導(dǎo)致染色強(qiáng)度增加。
圖1.在Jurkat細(xì)胞中檢測(cè)膜聯(lián)蛋白VmFluor Violet 450和磷脂酰絲氨酸的結(jié)合活性。 將Jurkat細(xì)胞在37℃，5％CO2培養(yǎng)箱中不用（藍(lán)色）或用1μM星形孢菌素（紅色）處理5小時(shí)，然后用Annexin V-mFluor Violet 450染色30分鐘。 使用FACSCalibur（Becton Dickinson，San Jose，CA）流式細(xì)胞儀，使用紫外激光在Ex / Em = 405 / 450nm下測(cè)量膜聯(lián)蛋白V-mFluor Violet 450的熒光強(qiáng)度。
5.參考文獻(xiàn)
Resources-Application Notes Phenotypic and Epigenetic Mechanism of Action Determinations of Histone Methylase and Demethylase Inhibitors using Digital Widefield Microscopy
Authors: Brad Larson, Peter Banks
Journal: Experimental Biology (2017)
Targeted Magnetic Intra-Lysosomal Hyperthermia produces lysosomal reactive oxygen species and causes Caspase-1 dependent cell death
Authors: Pascal Clerc, Pauline Jeanjean, Nicolas Halalli, Michel Gougeon, Bernard Pipy, Julian Carrey, Daniel Fourmy, Véronique Gigoux
Journal: Journal of Controlled Release (2017)
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