1.什么是納米抗體
納米抗體是由比利時科學家于1993年在自然雜志中首次報道。傳統(tǒng)抗體分子(IgG)是由兩條相同的重鏈和兩條相同的輕鏈組成的結構比較保守的抗體分子�？贵w分子的輕鏈包含1個VL區(qū)和1個CL區(qū)，而重鏈則擁有1個VH區(qū)和3個CH區(qū)(CH1、CH2和CH3)。
 
羊駝只有重鏈抗體缺少輕鏈，由4個HC和2個VH組成，其中VHH區(qū)域又被稱為納米抗體或單域抗體（single domain antibody，sdAb），納米抗體（Nanobody, Nb）晶體為2.5nm，長4nm，分子量只有15KDa。納米抗體主要用于生物醫(yī)藥研發(fā)（基因工程藥物研發(fā)、ADC藥物研發(fā)）；用于臨床體外診斷（膠體金法、酶聯(lián)免疫吸附法、電化學發(fā)光法）；用于腫瘤研究、免疫學等基礎研究領域，目前CAR-T治療型抗體開發(fā)受到越來越多科研工作者的關注。

 
2.納米抗體的優(yōu)缺點
2.1 納米抗體的優(yōu)點
（1）在高溫和pH下的穩(wěn)定性；
（2）VHH可以識別通常不被常規(guī)抗體識別的抗原位點；
（3）它們的小分子片段有助于快速組織滲透和標記應用，包括跨越血腦屏障；
（4）用于大規(guī)模生產(chǎn)節(jié)約成本的替代品。
2.2納米抗體的缺點
納米抗體（VHH抗體）由于分子量較小，約為15kDa，相當于傳統(tǒng)IgG抗體重鏈或輕鏈的可變區(qū)，因此針對VHH抗體的二抗不具有普遍適用性，需要將VHH融合Fc片段進行共表達進行解決二抗識別問題（卡梅德生物提供多種抗羊駝二抗，可用于免疫血清效價檢測，Cat.#：SPAB01，SPAB03）
 
3.納米抗體（VHH抗體）主要應用方向
基于納米抗體優(yōu)良的性能，目前被廣泛應用于CAR-T治療型抗體開發(fā)。
CAR-T療法是嵌合抗原受體T細胞免疫療法，這是一種治療腫瘤的新型精準靶向療法。通過基因工程技術，將T細胞激活，并裝上定位導航裝置CAR（腫瘤嵌合抗原受體），將T細胞這個普通“戰(zhàn)士”改造成“超級戰(zhàn)士”，即CAR-T細胞，他利用其“定位導航裝置”CAR，專門識別并消滅體內(nèi)腫瘤細胞，從而達到腫瘤治療的目的。
 
4.卡梅德生物能夠為客戶提供高質(zhì)量的駝源納米抗體開發(fā)服務
 
卡梅德生物可以提供多種駝源納米抗體開發(fā)服務，包括羊駝、大羊駝、駱駝、美洲駝等，基于噬菌體展示技術平臺，卡梅德生物可以提供包括抗原設計、羊駝免疫、文庫構建與篩選、活性功能驗證等主要實驗環(huán)節(jié)，并為全球的科學家提供高特異性和高親和力的羊駝VHH抗體。
 
5.卡梅德生物為客戶提供駝源抗體開發(fā)的全流程介紹
 
主要包括以下步驟:羊駝免疫，噬菌體文庫構建，抗體庫篩選，抗體表達與功能驗證。詳細流程如下:

 
5.1羊駝免疫
卡梅德生物提供健康的成年羊駝（28-36月大）進行免疫，約16-20周即可獲得高質(zhì)量的文庫和單抗細胞株，交付完整的實驗過程記錄和免疫動態(tài)視頻�？�梅德生物根據(jù)客戶的抗原類型，會制定特定的免疫抗原制備方案以及免疫方案。
 
5.1.1抗原準備：客戶提供抗原，弗氏佐劑的使用量是1ml，將抗原和佐劑以1:1混合進行免疫。
5.1.2羊駝免疫:免疫5次，每次間隔20天，在羊駝頸部進行注射，免疫后1小時觀察羊駝是否有不適癥狀。
 

 
5.1.3采血：免疫前進行采血，留作陰性對照，在第三、第四次免疫后間隔一星期進行采血5ml效價測定，ELISA檢測血清效價，效價滿足要求＞10⁵�？�梅德生物為客戶提供清晰的免疫時間節(jié)點信息表，如表1所示：
 
表1：卡梅德生物納米抗體制備免疫時間進程舉例

次數(shù)	免疫日期
第一次	2020年11月25日
第二次	2020年12月16日
第三次	2021年1月6日
第四次	2021年1月27日
第五次	2021年2月18日

5.1.4PBMC細胞分離：取外周血100-120mL，PBMC細胞總數(shù)為4*10⁷-10⁸個，全部郵寄給客戶。
 
5.2噬菌體文庫構建
卡梅德生物使用M13噬菌體的pIII蛋白進行VHH抗體（納米抗體）表面展示，制備TG1電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞，構建噬菌體載體，并進行噬菌體庫容測定。
5.2.1RNA提�。喊凑丈虡I(yè)化試劑盒操作進行RNA提取。

5.2.2CDNA反轉(zhuǎn)錄合成：按照商業(yè)化試劑盒操作進行cDNA制備。
5.2.3PCR擴增：以cDNA為模板，PCR擴增重鏈抗體基因可變區(qū)，擴增2輪。
5.2.4連接載體并電轉(zhuǎn)化：酶切、連接噬菌粒載體，電擊轉(zhuǎn)化TG1宿主菌，構建抗體庫。
5.2.5細菌文庫/噬菌體文庫建立：計算庫容量，庫容量交付標準10⁸～10⁹。
 
5.3抗體庫篩選
常規(guī)使用的篩選方法是固相篩選，磁珠和細胞篩選（常用于GPCR，離子通道受體的抗體篩選）。
卡梅德生物為客戶提供定制化的篩選體系，根據(jù)客戶的需求不同，我們提供固相篩選，固相/液相篩選以及細胞篩選的方法。前兩者適用于蛋白，多肽一類靶抗原的篩選；第三種適用于GPCR，離子通道受體的抗體篩選。通過不同的篩選方法，可以為客戶高效的篩選出不同類型的阻斷型抗體
 
5.4抗體表達與功能驗證
5.4.1表達：構建哺乳表達體系進行抗體表達，卡梅德建立了完善的哺乳表達體系，包括但不限于FreeStyle 293-F cell line和Expi CHO-S等細胞系，配合卡梅德設計的高表達載體（含有全長的CMV啟動子以及優(yōu)化后的分泌信號肽序列）進行重組抗體表達與制備。

5.4.2純化：納米抗體過鎳柱純化。
5.4.3親和力測定：將純化好的納米抗體進行Biacore親和力檢測。
 
 
 
 

 
卡梅德生物科技（天津）有限公司于2014年成立于中國天津，在西北地區(qū)擁有大型的羊駝養(yǎng)殖基地，公司每年為科研用戶提供200+羊駝納米抗體制備服務，制備周期短，約16-20周即可獲得高質(zhì)量的文庫和單抗細胞株，可交付VHH抗體文庫2ml，庫容量高達10⁸-10⁹，歡迎廣大科研用戶朋友來咨詢。