全能核酸酶使用技巧及典型應(yīng)用
瀏覽次數(shù):805 發(fā)布日期:2022-12-29
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這一篇,我們?yōu)榇蠹規(guī)砀钊氲暮怂崦甘褂眉记!和大家一起探討如何在實際使用中更好地調(diào)整我們的實驗方法,讓核酸酶發(fā)揮最大的作用!本篇主要在尿素變性條件使用、低溫環(huán)境以及核酸酶滅活與去除等幾個問題上做出解答。
典型應(yīng)用:
新冠滅活疫苗生產(chǎn)過程中宿主DNA的去除
傳統(tǒng)疫苗工藝純化過程中去除宿主核酸
細胞或基因治療病毒載體制備流程宿主核酸的去除
重組蛋白純化或組織細胞樣品蛋白提取時去除核酸污染
與細胞或細菌裂解液配合使用,去除粗提物中的核酸,降低溶液粘性,提高蛋白產(chǎn)量
減少存放的外周血單細胞(PBMC)的結(jié)塊現(xiàn)象)
讓我們來看看Pannarse全能核酸酶在使用上更深入的一些小介紹吧!
1. 當(dāng)?shù)鞍兹芙庑圆?/strong>需要變性,變性環(huán)境對核酸酶有影響嗎?
常見的變性條件下一般會使用高濃度尿素。Pannarase核酸酶在尿素濃度6M時,隨著時間延長活性會逐漸減少。在7M尿素濃度下,核酸酶15min后出現(xiàn)變性失活,但在酶失活前多數(shù)核酸已降解,可通過提高核酸酶濃度補償高濃度尿素影響。
2. 當(dāng)反應(yīng)溫度低于37℃時,如何保證核酸酶消化效果?
體系固定的情況下,核酸酶消化效果取決于酶用量、反應(yīng)溫度和反應(yīng)時間。當(dāng)反應(yīng)溫度較低時,為避免過多的核酸酶引起的殘留問題,更加推薦延長反應(yīng)時間來保證消化效果。
怎樣滅活Pannarase核酸酶?如何去除?
采用EDTA螯合金屬離子會可逆地抑制核酸酶活性,極端條件會造成不可逆失活,例如100mM NaOH,70℃處理30min等。核酸酶可采用陰離子交換柱從目的產(chǎn)物中分離出去。
關(guān)于常用反應(yīng)液和減少用量 ,你應(yīng)該知道~~
常用生物緩沖液,如TBS、MOPS(pH6-8)等。如需減少用量,可酌情提高反應(yīng)溫度或延長時間。
以上是我們關(guān)于核酸酶使用的更深一步的技巧介紹,后續(xù)我們會持續(xù)更新為您的實驗提供更多參考,敬請關(guān)注!
相關(guān)產(chǎn)品信息:
Pannarase全能核酸酶五大特點:
1. 杰出的比酶活,更高效的核酸降解能力
2. 規(guī)范的液相標(biāo)準(zhǔn)品定量,出色的質(zhì)譜均一性認(rèn)證
3. 嚴(yán)格的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn),確保單位酶活的準(zhǔn)確性以及批次間穩(wěn)定性
4. 無動物源性物料
5. 先進的生產(chǎn)工藝,非傳統(tǒng)His標(biāo)簽純化,排除引入金屬離子風(fēng)險