ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù)。在檢測時,受檢標(biāo)本(測定其中的抗原)與固相載體表面的抗體反應(yīng)。以下來一起了解ELISA標(biāo)本的處理及保存:
一、ELISA標(biāo)本的處理
1.血清:室溫血液私人凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。
2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清,如有沉淀形成,應(yīng)再次離心
3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成分時,用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)仔細(xì)收集上清,檢測細(xì)胞內(nèi)的成分時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右,通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成分。
5. 組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量,加入一定量的PBS,PH7.4,用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆,?biāo)本融化后任然保持2-8°C的溫度,加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清,分裝后一份待檢測,其余冷凍備用,
6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行試驗,若不能馬上進(jìn)行試驗,可將標(biāo)本放于-20°C保存,單應(yīng)避免反復(fù)凍融。
二、ELISA標(biāo)本的保存:
一般來說,再5天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可放置于4°C,標(biāo)本再冰箱中保存時間過長會導(dǎo)致血清IgG聚合,是間接法的試劑本底加深,超過一周測定的需-20°C保存,凍結(jié)血清溶解后,蛋白質(zhì)局部濃縮,分不均,應(yīng)充分混勻并避免產(chǎn)生氣泡。
1、渾濁或有沉淀的血清標(biāo)本應(yīng)先離心或過濾,澄清后再檢測。
2、測抗體的血清的標(biāo)本如需保存作多次檢測,以少量分裝冰存,
3、保存血清只采集是就應(yīng)注意無菌操作,也可加入適當(dāng)?shù)姆栏瘎,抗凝不完全的?biāo)本因纖維蛋白元的干擾而造成假陽性,建議勁量不使用抗凝血尤其是肝素抗凝劑。