就一個(gè)實(shí)驗(yàn)室而言無(wú)論運(yùn)作的多么好，總會(huì)因?yàn)楦镄录夹g(shù)或拓展方向二影響原來(lái)的流程，從而產(chǎn)生各種各樣的問(wèn)題。有些地方錯(cuò)誤的操作有可能帶來(lái)嚴(yán)重的后果，那么今天主要列舉細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢的兩大原因。

一、培養(yǎng)體系出現(xiàn)問(wèn)題

01檢查你所培養(yǎng)的細(xì)胞是否存在污染。

（1）如果培養(yǎng)細(xì)胞未添加抗生素，細(xì)胞污染則是不可避免的。

① 用肉眼和顯微鏡進(jìn)行檢查。

② 如果細(xì)胞被污染則要棄掉。

（2）由于支原體污染不容易覺(jué)察到，因此必須定期檢測(cè)。

（3）檢測(cè)可能污染的途徑和原因。
 

02檢查你用于培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基和血清（例如：是否批次不同或廠商不同）。如果你常規(guī)使用的是粉劑或10×儲(chǔ)存液，而現(xiàn)在購(gòu)買(mǎi)的培養(yǎng)基更換為1×液體，而隨后證明問(wèn)題就出自于此。
 

03如果問(wèn)題與培養(yǎng)基無(wú)關(guān)，那么很可能還是細(xì)胞的問(wèn)題。

（1）復(fù)蘇另一支凍存的細(xì)胞，并且與正在培養(yǎng)的細(xì)胞加以比較。兩種細(xì)胞的培養(yǎng)應(yīng)分開(kāi)，以免在培養(yǎng)之初就產(chǎn)生污染。隨后按（2）～（4）步的方法做排查。

（2）對(duì)傳代培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，并繪制生長(zhǎng)曲線，與以前培養(yǎng)該細(xì)胞的資料進(jìn)行比較，檢查是否有下列改變:

① 傳代時(shí)是否接種密度過(guò)低。

② 細(xì)胞傳代是否過(guò)于頻繁。

③ 傳代前細(xì)胞平臺(tái)期是否過(guò)長(zhǎng)。

（3）是否更換了胰蛋白酶或其他分離劑的批號(hào)，檢查批號(hào)和供貨商。

（4）是否細(xì)胞分離過(guò)程中嚴(yán)重?fù)p傷了細(xì)胞，應(yīng)檢測(cè):

① 胰蛋白酶（其他消化試劑）消化時(shí)間是否過(guò)長(zhǎng)。

② 消化液的濃度和活性是否過(guò)高、過(guò)強(qiáng)。

③ 胰蛋白酶消化時(shí)，孵箱溫度是否過(guò)高。

④ 吹打消化細(xì)胞時(shí)是否過(guò)于用力。

⑤ 細(xì)胞是否對(duì) EDTA過(guò)于敏感（如果添加了EDTA）。

⑥ 胰蛋白酶稀釋是否有誤。

⑦ 是否使用了一批劣質(zhì)的胰蛋白酶消化液。 
 

二、檢查共用的設(shè)備和試劑

 

01溫度設(shè)定不準(zhǔn)

a　自動(dòng)調(diào)溫器損壞。

b　開(kāi)關(guān)孵箱門(mén)過(guò)于頻繁。

c　孵箱門(mén)未關(guān)緊。

d　風(fēng)扇損壞造成散熱不均。

02孵箱濕度不能維持

a　水盤(pán)中未加水。

b　孵箱有滲漏。

c　開(kāi)關(guān)孵箱門(mén)過(guò)于頻繁。

d　在Petri培養(yǎng)皿中放置一定量的PBS，每日稱重，以檢查蒸發(fā)率。

03孵箱的CO2濃度不準(zhǔn)

a　開(kāi)關(guān)孵箱門(mén)過(guò)于頻繁。

b　CO2控制器出現(xiàn)問(wèn)題。

相關(guān)產(chǎn)品

產(chǎn)品名稱：BEAS-2B(人正常肺支氣管上皮細(xì)胞)

貨號(hào)：SNL-203

產(chǎn)品名稱：特級(jí)胎牛血清（來(lái)自南美純正血源）

貨號(hào)：SNS-002

產(chǎn)品名稱：胰酶（含EDTA）

貨號(hào)：SNT-002

武漢尚恩生物技術(shù)有限公司坐落于武漢東湖高新區(qū)光谷生物城，專注于細(xì)胞及系列產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)和服務(wù)，公司建有標(biāo)準(zhǔn)化GMP實(shí)驗(yàn)室、動(dòng)物房，已整體通過(guò)ISO 9001:2015質(zhì)量管理體系認(rèn)證，獲得高新技術(shù)企業(yè)、3551人才、瞪羚企業(yè)、科技小巨人等多項(xiàng)榮譽(yù)�！　�

公司主要研發(fā)生產(chǎn)細(xì)胞系、原代細(xì)胞、胎牛血清、基礎(chǔ)培養(yǎng)基、完全培養(yǎng)基、輔助試劑等系列產(chǎn)品，提供細(xì)胞及培養(yǎng)配套產(chǎn)品一站式采購(gòu)；細(xì)胞庫(kù)凍存細(xì)胞系500余種，同時(shí)通過(guò)不間斷引種細(xì)胞擴(kuò)大豐富細(xì)胞種類；公司還提供人源細(xì)胞系的STR鑒定、大小鼠的種屬鑒定服務(wù)等�！　�

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