冷凍細(xì)胞活化步驟介紹
瀏覽次數(shù):219 發(fā)布日期:2022-8-29
來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
冷凍細(xì)胞活化:
1、冷凍細(xì)胞之活化原則為快速解凍,以避免冰晶重新結(jié)晶而對細(xì)胞造成傷害,導(dǎo)致細(xì)胞之死亡。
2、細(xì)胞活化后,約需數(shù)日,或繼代一至二代,其細(xì)胞生長或特性表現(xiàn)才會恢復(fù)正常(例如產(chǎn)生單株抗體或是其它蛋白質(zhì))。
3、材料
37℃恒溫水槽、新鮮培養(yǎng)基、無菌吸管/離心管/培養(yǎng)瓶、液氮或干冰容器
4、步驟:
1)、操作人員應(yīng)戴防護(hù)面罩及手套,防止冷凍管可能爆裂之傷害。
2)、自液氮或干冰容器中取出冷凍管,檢查蓋子是否旋緊,由于熱脹冷縮過程,此時蓋子易松掉。
3)、將新鮮培養(yǎng)基置于37℃水槽中回溫,回溫后噴以70%酒精并擦拭之,移入無菌操作臺內(nèi)。
4)、取出冷凍管,立即放入37℃水槽中快速解凍,輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化,以70%酒精擦拭保存管外部,移入無菌操作臺內(nèi)。
5)、取出解凍之細(xì)胞懸浮液,緩緩加入有培養(yǎng)基之培養(yǎng)容器內(nèi)(稀釋比例為1:10~1:15),混合均勻,放入CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。取0.1ml解凍細(xì)胞懸浮液作存活測試。
6)、解凍后是否立即去除冷凍保護(hù)劑(例如DMSO或glycerol),依細(xì)胞種類而異,一般而言,大都不需要立即去除冷凍保護(hù)劑。惟若要立即去除,則將解凍之細(xì)胞懸浮液加入含有5-10ml培養(yǎng)基之離心管內(nèi),離心1000rpm,5分鐘,移去上清液,加入新鮮培養(yǎng)基,混合均勻,放入CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
7)、若不需立即去除冷凍保存劑,則在解凍培養(yǎng)后隔日更換培養(yǎng)基。