注   意 ：正式測定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義：
蔗糖轉(zhuǎn)化酶（Invertase，Ivr）催化蔗糖不可逆地分解為果糖和葡萄糖，是高等植物蔗糖代謝關(guān)鍵酶之一。根據(jù)最適 pH，Ivr分為酸性轉(zhuǎn)化酶（AI）和中性轉(zhuǎn)化酶（NI）兩種類型。                           
AI的最適pH為3～5。AI分為可溶性AI(S-AI)和細(xì)胞壁不溶性AI（B-AI）兩種類型。B-AI存在于細(xì)胞間隙并結(jié)合在細(xì)胞壁上，主要參與韌皮部質(zhì)外體卸載時(shí)蔗糖的分解，以維持庫源之間蔗糖的濃度。
 
測定原理：
B-AI催化蔗糖降解產(chǎn)生還原糖，進(jìn)一步與3,5－二硝基水楊酸反應(yīng)，生成棕紅色氨基化合物，在510nm有特征光吸收，在一定范圍內(nèi)510nm光吸收增加速率與B-AI活性成正比。
 
自備用品：
可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
 
試劑組成和配制：
提取液1：液體50mL×1瓶，4℃保存;
提取液2：液體50mL×1瓶，4℃保存;
試劑一：液體50mL×1瓶，4℃保存;
試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存；臨用前加入25mL試劑一充分溶解備用；用不完的試劑4℃保存;
試劑三：液體30mL×1瓶，4℃保存；
 
粗酶液提取：
按照組織質(zhì)量（g）：提取液1體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液1），進(jìn)行冰浴勻漿。12000g 4℃離心10min，棄上清，沉淀中加入1mL蒸餾水，充分震蕩混勻，12000g 4℃離心10min，棄上清，沉淀中加入1mL提取液2 充分混勻，4℃浸提過夜，12000g 4℃離心20min，取上清置冰上待測。
 
測定步驟和加樣表：

試劑名稱（μL）	測定管	對照管
樣本	200	200
試劑一		800
試劑二	800

混勻， 37℃準(zhǔn)確水浴30min后，95℃水浴10min（蓋緊，以防水分散失），流水冷卻后充分混勻（以保證濃度不變）

試劑三

500

500

混勻，95℃水浴10min（蓋緊，以防止水分散失），流水冷卻后充分混勻， 510nm處，蒸餾水調(diào)零，記錄各管吸光值A(chǔ)，如果吸光值大于2，可以用蒸餾水稀釋后測定(計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù))，ΔA=A測定-A對照。
 
B-AI活性計(jì)算：
標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y = 0.0016x -0.001；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μg/mL），y為吸光值。
（1）按蛋白濃度計(jì)算：
單位的定義：37℃每mg蛋白每分鐘產(chǎn)生1μg還原糖定義為一個(gè)酶活性單位。
B-AI活性（μg/min/mg prot）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(V1×Cpr ) ÷T=20.8×(ΔA +0.001) ÷Cpr
（2）按鮮重計(jì)算：
單位的定義：37℃每g組織每分鐘產(chǎn)生1μg還原糖定義為一個(gè)酶活性單位。
B-AI活性（μg/min/g鮮重）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(W ×V1÷V2) ÷T =20.8×(ΔA +0.001) ÷W
V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.2mL；V2：加入提取液體積，1mL；T：反應(yīng)時(shí)間，30min； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g。