牛血清白蛋白(BSA),是牛血清中的一種球蛋白,包含607個(gè)氨基酸殘基,分子量為66.446KDa,等電點(diǎn)為4.7。牛血清白蛋白在生化實(shí)驗(yàn)中有廣泛的應(yīng)用。
一、牛血清白蛋白的作用:
牛血清白蛋白一般做為穩(wěn)定劑被用于限制酶或者修飾酶的保存溶液和反應(yīng)液中,因?yàn)橛行┟冈诘蜐舛认虏环(wěn)定或活性低。加入牛血清白蛋白后,它可能起到“保護(hù)"或“載體"作用,不少酶類添加牛血清白蛋白后能使其活性大幅度提高。對多數(shù)底物牛血清白蛋白而言,牛血清白蛋白可以使酶切更完全,并可實(shí)現(xiàn)重復(fù)切割。在37℃,酶切反應(yīng)超過1h時(shí),牛血清白蛋白可以使酶更加穩(wěn)定,因?yàn)樵诓缓Q灏椎鞍椎姆磻?yīng)緩沖液中,許多限制性內(nèi)切酶在37℃下只能存活10"20min甚至更短的時(shí)間。而BSA可以結(jié)合緩沖液或底物DNA中抑制限制性內(nèi)切酶活性的金屬離子和其它化學(xué)物質(zhì)。
二、牛血清白蛋白的成分:
1、蛋白質(zhì):是牛血清中主要成份。除包括可攜帶金屬離子、脂肪酸和自身是激素類蛋白外主要還有白蛋白,球蛋白。纖維粘連素細(xì)胞促進(jìn)細(xì)胞附著;α2巨球蛋白抑制胰蛋白酶的作用;胎牛血清中含胎球蛋白促細(xì)胞附著;轉(zhuǎn)鐵蛋白能結(jié)合鐵離子,減少其毒性和被細(xì)胞利用。
2、多肽:血小板促生長因子能促細(xì)胞分裂,是多肽家庭的主要成員之一,是主要的促細(xì)胞增殖因子;成纖維細(xì)胞生長因子、表皮細(xì)胞生長因子、神經(jīng)細(xì)胞生長因子等,血清中含量雖很少,但對細(xì)胞生長也有一定作用。
3、激素:胰島素:促進(jìn)細(xì)胞攝取葡萄糖和氨基酸,與促細(xì)胞分裂有關(guān)。類胰島素生長因子:能與細(xì)胞表達(dá)的胰島素受體結(jié)合,從而有胰島素同樣的作用。促生長激素:促細(xì)胞增殖效應(yīng)。
4、其他成份:氨基酸、葡萄糖、酮酸等對多種營養(yǎng)成分的合成培養(yǎng)基意義不大。與蛋白相結(jié)合狀態(tài)的微量元素對細(xì)胞培養(yǎng)有意義。
三、關(guān)于牛血清白蛋白的常見問題:
1、標(biāo)準(zhǔn)牛血清白蛋白在應(yīng)用時(shí)濃度要適宜,不可太高。牛血清白蛋白組分V現(xiàn)配現(xiàn)用,已經(jīng)配好的溶液即使是-20度保存一段時(shí)間后也會(huì)造成你的結(jié)果偏高.
2、牛血清白蛋白由熱容易凝固,當(dāng)加熱到50°C或以上時(shí),白蛋白相當(dāng)迅速形成疏水性聚集體,不恢復(fù)到冷卻后的單體,在某種程度上低溫聚合預(yù)計(jì)也將會(huì)發(fā)生的,但是在相對較低的利率。
3、天然牛血清白蛋白(BSA)的等電點(diǎn)為4.6~5.8,經(jīng)無水乙二an(EDA)和碳化二亞胺(EDC)反應(yīng),改性后的牛血清白蛋白等電點(diǎn)為8.6。