Q：培養(yǎng)液到底要不要加雙抗（青霉素&鏈霉素）？
A：雙抗不是細(xì)胞生長必需的。我們培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)不常規(guī)使用抗生素，因?yàn)檫B續(xù)使用抗生素會(huì)促進(jìn)抗生素耐藥性細(xì)胞株的產(chǎn)生，導(dǎo)致輕度污染持續(xù)存在。一旦將抗生素從培養(yǎng)液中去除，這種輕度污染最終將發(fā)展成為大規(guī)模污染。具體情況，可根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境，自行決定是否使用雙抗。

Q：細(xì)胞培養(yǎng)，能更換成其它種類的培養(yǎng)基嗎？
A：我們強(qiáng)烈建議最好使用細(xì)胞提供機(jī)構(gòu)或細(xì)胞庫推薦的生長培養(yǎng)液。有些細(xì)胞可能會(huì)適應(yīng)在不同培養(yǎng)基中生長，在做好保種的條件下，可以分出部分細(xì)胞做測試。

Q: 細(xì)胞在培養(yǎng)過程中出現(xiàn)碎片如何處理？
A: 貼壁細(xì)胞在移除原培養(yǎng)液后，用 PBS 沖洗 2-3 遍；懸浮細(xì)胞離心移除原培養(yǎng)液后，加入 PBS 重懸，離心移除 PBS; 一般建議重復(fù)上述步驟 2-3 遍，用 800-1000rpm 離心 3-5 分鐘。

Q：細(xì)胞凍存能放在 -80℃ 保存嗎？
A：長期保存的細(xì)胞應(yīng)當(dāng)放在液氮（-196℃）中保存，短時(shí)間（一般 1 周-2 周）可以存放在 -80℃。

Q：培養(yǎng)瓶是用密封蓋好，還是用透氣蓋好？
A：都可以。只是在使用密封蓋培養(yǎng)瓶時(shí)，瓶蓋旋至約 2/3，不要完全擰緊，預(yù)留約 1/3 以便細(xì)胞可以透氣；有些品牌的密封蓋培養(yǎng)瓶的瓶蓋上有適合位置指示標(biāo)志。

Q:何謂 FBS,FCS,CS,HS?
A: Fetal bovine serum(FBS)和 Fetal Calf Serum(FCS)之間沒有區(qū)別，都是指胎牛血清；FCS 不是正規(guī)命名，盡量不使用。Calf Serum（CS）則是指小牛血清。Horse Serum(HS)則是指馬血清。

Q:血清中可能出現(xiàn)的沉淀物是什么？
A:基于多年的實(shí)驗(yàn)研究，用于細(xì)胞培養(yǎng)的胎牛血清以及其它血清中可能會(huì)存在以下種類的沉淀物：
（1）纖維蛋白，它是經(jīng)常出現(xiàn)的較大的沉淀物，可以達(dá)到 1-2mm，可以用肉眼觀察到。因?yàn)檠�清都是在低溫下進(jìn)行收集和快速處理的，一些纖維蛋白原（可溶性的形成絮狀纖維蛋白的前體）在處理過程中仍然處于溶解狀態(tài)，當(dāng)經(jīng)過最后的過濾分裝后，就會(huì)在瓶中凝結(jié)出現(xiàn)纖維蛋白沉淀。
（2）磷酸鈣，它也是常見的一種沉淀物，通常會(huì)使血清出現(xiàn)渾濁，并且在 37℃ 培養(yǎng)的時(shí)候會(huì)增加。這種沉淀物在倒置顯微鏡下觀察像小黑點(diǎn)， 這些小黑點(diǎn)由于布朗運(yùn)動(dòng)看上去可以活動(dòng)，因此經(jīng)常被誤認(rèn)為是微生物污染。
（3）膽固醇、脂肪酸酯以及一些蛋白質(zhì)。他們也是血清中出現(xiàn)沉淀物的常見原因。

Q:血清中的沉淀物對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)有什么影響？
A:（1）細(xì)胞生長，我們的試驗(yàn)以及經(jīng)驗(yàn)表明沉淀物不會(huì)影響細(xì)胞培養(yǎng)，我們的客戶以及其它血清生產(chǎn)商也證明了這一點(diǎn)。
（2）過濾，如果血清中出現(xiàn)大量的沉淀物，血清將很難過濾。一般說來，因?yàn)樵谘�清生產(chǎn)工序中已經(jīng)過 100nm 或者 40nm 的過濾處理，并且經(jīng)過了嚴(yán)格的無菌檢測，因此不推薦再過濾用于細(xì)胞培養(yǎng) 的血清。在實(shí)驗(yàn)室中沒有必要再過濾處理血清，在大規(guī)模的細(xì)胞培養(yǎng)中往往將血清直接加到培養(yǎng)基中一起 過濾。
（3）污染，磷酸鈣往往被誤認(rèn)為微生物污染而引起爭端。研究者可能會(huì)在血清中觀察到一些絮狀的 沉淀，因此就會(huì)比較警覺的去做無菌試驗(yàn)，將血清放在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)幾天，結(jié)果可能會(huì)觀察到更多的絮狀 沉淀，因此就斷定血清被污染了。并且當(dāng)研究者將血清樣品放在倒置顯微鏡下觀察時(shí)往往可以看到一些可 以運(yùn)動(dòng)的小黑點(diǎn)，因此就更加確認(rèn)是血清被污染了。于是，研究者就會(huì)花費(fèi)更多的時(shí)間和精力來和生產(chǎn)商 確認(rèn)，但最終確定血清沒有被污染而只是沉淀。為了避免這些問題的發(fā)生，我們建議不要直接將血清放在 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)觀察是否有菌，而是將血清加到瓊脂板上進(jìn)行培養(yǎng)以觀察是否有細(xì)菌生長。另外，也可以進(jìn) 行革蘭氏染色，在油鏡下觀察，以確認(rèn)是否有污染。

Q:如何避免血清中沉淀物的出現(xiàn)？
A:首先要注意正確的血清解凍步驟，而且溶解過程中一定要每隔一段時(shí)間均勻而緩慢的搖動(dòng)血清。我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在下列情況下沉淀物可能增加，使用中應(yīng)該盡量避免：
（1）熱滅活血清；
（2）在 37℃ 下培養(yǎng)血清；
（3）反復(fù)凍融；
（4）γ 射線照射；
（5）長期儲(chǔ)存在 2-8℃；
（6）在室溫下放置時(shí)間過長

Q:如何去除血清中的沉淀？
A:如想去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝到無菌離心管中，以  400g  離心，上清液即可直接加入到培養(yǎng)基 內(nèi)一起過濾。
注意：不要以過濾的方式去除這些絮狀沉淀物，因?yàn)檫@可能阻塞濾膜。