HepG2培養(yǎng)常見問題匯總與解答
HepG2 / 細胞介紹
HepG2細胞是來源于一個15歲白人的肝癌組織；分泌多種血漿蛋白：清蛋白、α2-巨球蛋白、血纖維蛋白溶酶原、轉(zhuǎn)鐵蛋白等；模式染色體數(shù)為55；該細胞在免疫抑制小鼠中不致瘤；是一個合適的轉(zhuǎn)染宿主；表達標志物包括胰島素受體；胰島素樣生長因子II（IGF II）受體。
HepG2可以分泌多種血漿蛋白，主要用于肝癌的實驗研究�？梢匝芯考毎脑鲋郴钚�、凋亡能力、對藥物的反應(yīng)等情況，也可以將HepG2細胞種植在小白鼠或大鼠的體內(nèi)形成人工的肝細胞癌，之后用藥物來治療這種人工的肝細胞癌，觀察用藥治療的效果。
| 名稱 | HepG2（人肝癌細胞） |
| 形態(tài) | 上皮樣 |
| 生長特性 | 貼壁；傳代比例 1:4 -1:6 |
| 營養(yǎng)體系 | MEM(C3050-0500) + 10% FBS(C04002) |
HepG2
人肝癌細胞
HepG2 / 細胞復(fù)蘇
1. 配制完全培養(yǎng)基：基礎(chǔ)培養(yǎng)基+胎牛血清+雙抗（特殊培養(yǎng)基特殊配置）；
2. 細胞復(fù)蘇：取5ml完全培養(yǎng)基于15ml離心管中，37℃水浴鍋預(yù)熱，從液氮罐（或者-80℃冰箱）中快速取出凍存的細胞，放入37℃水浴鍋中，搖晃使快速化凍（1min左右），然后將化凍的細胞和預(yù)熱的培養(yǎng)基，移入超凈工作臺中，化凍的細胞加入到含預(yù)熱培養(yǎng)基的15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3. 吸棄上清，得到細胞沉淀，用2ml完全培養(yǎng)基輕輕重懸細胞，加入到T25培養(yǎng)瓶中，做好標記，放入37℃，5%CO2飽和適度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)（培養(yǎng)皿復(fù)蘇效果更好）；
4. 24h后，觀察細胞貼壁情況（未貼壁的即為死細胞--針對貼壁細胞），吸棄舊培養(yǎng)基，加入新鮮的預(yù)熱（室溫或37℃）的完全培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)。
HepG2 / 細胞傳代
細胞一般是3、4天傳代一次。若是長時間該換液不換液或者不傳代也換液就容易導(dǎo)致細胞漂浮死亡吸去培養(yǎng)液。用PBS輕微沖洗一遍，加入不含EDTA的0.25%胰酶，放置在37℃的培養(yǎng)箱中，2分鐘，即可輕松吹打下來。再放入1.5ml錐型離心管中，800轉(zhuǎn)每分鐘，離心3分鐘，目的是除去細胞碎片等其他雜質(zhì)，使細胞更加干凈。后將離心管中上清液吸出，只留下沉淀，再加入新鮮的完全培養(yǎng)基，吹打均勻后加入到細胞瓶中或者平皿中。
HepG2 / 細胞凍存
1. 90%血清+10%細胞培養(yǎng)級別的DMSO，先放入凍存盒中12小時至24小時。
2. 后轉(zhuǎn)移到液氮當(dāng)中。如沒有凍存盒，則需要將細胞放入4℃冰箱中12小時左右。
3. 再轉(zhuǎn)移至-20℃12小時左右，再轉(zhuǎn)移到-80℃后12小時左右，最后放入液氮。
HepG2
細胞狀態(tài)好的形態(tài)學(xué)表現(xiàn)有哪些？
細胞狀態(tài)好的特點：細胞克隆成島狀，背景干凈
HepG2
傳代時，怎樣才能使HepG2消化成單個細胞？
長勢良好的HepG2
原因推斷：HepG2在體外培養(yǎng)時容易聚團呈島狀，且如果長得過滿，輕度消化就成片下來，容易成團。
解決辦法：
-
融合率達到80%即可傳代，長太滿容易成片脫落。
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先用胰酶消化約3分鐘，用完培終止消化作用，然后用移液管將細胞懸液吸起，將管口稍微用力按在培養(yǎng)瓶底部，用力快速將細胞懸液擠出（可重復(fù)一次），可有效減輕細胞聚團。
HepG2
細胞主要用于哪些實驗研究？
肝炎病毒研究：HepG2是常用的研究HBV和HCV細胞系模型，利用CRISPR/Cas9構(gòu)建基因敲除HepG2的HBV感染細胞模型細胞，為徹底治愈乙肝提供新思路。
體外肝癌（HCC）模型：HepG2中p53抑癌基因無突變，因此可用于研究p53與肝細胞癌（HCC）的密切關(guān)系，以及HCC的發(fā)病、診治、預(yù)防。
藥物研究：肝臟是人體內(nèi)藥物代謝的最主要器官，也是重要的解毒器官。HepG2細胞系無論在形態(tài)上還是功能上都更接近于人的肝組織，該細胞系常用于藥物代謝和肝毒性研究。
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