THP-1細胞系是1980年Tsuchiya等人建立的人單核細胞白血病細胞系。它來自一位急性單核細胞白血病患者的血液，有分化為多種巨噬細胞的能力，是各領域研究常用的細胞系之一。

THP-1是人外周血的單核細胞系，最初來源于急性單核細胞性白血病患者。屬于懸浮細胞，適合用于轉(zhuǎn)染或感染實驗。其表面抗原HLA型為：A2，A9，B5，DRw1，DRw2。

|  細胞復蘇

1. 預熱水浴鍋至37℃

2. 準備一個15mL離心管，加入2-3mL左右完全培養(yǎng)基待用

3. 將細胞從-80℃冰箱或液氮中取出后，放進一次性PE手套中，立即投入水浴鍋，迅速用力搖晃管子，使其1分鐘內(nèi)融化

4. 酒精擦拭凍存管，進入生物安全柜，把融化的細胞懸液緩慢滴加到步驟2準備好的離心管中

5. 1200rpm（約250g）離心3分鐘

6. 同時準備1個新的T25培養(yǎng)瓶，加入5mL完全培養(yǎng)基

7. 去上清，新鮮培養(yǎng)基重懸細胞后滴加到步驟6的培養(yǎng)瓶里，放入培養(yǎng)箱

小貼士：THP-1細胞復蘇后通常需要3-5天恢復狀態(tài)，建議復蘇后48小時內(nèi)不要進行操作。

 

| 細胞凍存

1. 預先配制好凍存液

【推薦海星HyCyte™一步凍存液(即用型、無血清、無需程序降溫)】

2. 細胞1200rpm（約250g）3分鐘離心后

3. 去上清，用配好的凍存液重懸細胞

4. 轉(zhuǎn)移入凍存管

5. 凍存管放進程序凍存盒

6. 凍存盒放進-80度冰箱過夜，再放液氮長期保存

小貼士：由于THP-1是懸浮細胞，更易受到凍存影響，建議加大凍存密度，大約200萬-300萬/mL為宜，以提高復蘇存活率。

 

| 培養(yǎng)條件

培養(yǎng)基：RPMI-1640+10%FBS+0.05 mM β-mercaptoethanol+1%P/S

推薦傳代比例：1:3-1:6，每2-3天換液一次

培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%CO2，溫度：37℃

 

| 傳代操作

當細胞密度達到約8x10^5cells/ml左右時，即可進行傳代。由于是懸浮細胞，可直接將細胞吸出，離心之后傳代。傳代最少濃度不應少于1x10^5 cells/ml。

去掉培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基，加入PBS進行沖洗，并去上清;

加入胰酶進行潤洗，并去上清;

放入CO2培養(yǎng)箱消化2-4min;

加入完全培養(yǎng)基終止消化，并吹打均勻。

 

| 常見問題

1. 收貨時細胞出現(xiàn)偽足，或是碎片較多怎么辦？

受到運輸影響，懸浮細胞會短暫性出現(xiàn)形態(tài)改變的現(xiàn)象，如偽足等。通過傳代培養(yǎng)，1周左右可以恢復正常。一些細胞在運輸途中死亡而產(chǎn)生碎片，通過傳代離心可以去除（見上文傳代篇）。

 

2. 培養(yǎng)過程中細胞發(fā)生貼壁怎么辦？

少量細胞貼壁屬于正常情況，將細胞懸液轉(zhuǎn)移至新瓶中即可。當貼壁細胞的比例高于20%，說明細胞生長環(huán)境有異常，需排查培養(yǎng)箱設置、培養(yǎng)基成分，以及培養(yǎng)器皿是否異常。

 

3. 培養(yǎng)過程中細胞發(fā)生聚團怎么辦？

少量細胞聚團，呈葡萄串狀，屬于正常現(xiàn)象，特別是細胞密度較低時，易出現(xiàn)這種情況。更換血清品牌或增大血清比例（不超過20%）有助于解決聚團問題。不建議將聚團的細胞吹散，等待密度高時，會自己分散開。

 

4. 培養(yǎng)基里一定要加β-巰基乙醇嗎？

β-巰基乙醇是一種常用的培養(yǎng)補充劑，有抗氧化的作用，可減少氧化應激對THP-1細胞的影響。當細胞密度過大但需要維持時，可適當增加巰基乙醇的比例（不超過標準量的1.5倍）。

 

5. 鏡下觀察時，難以聚焦或估算密度怎么辦？

懸浮細胞會隨著液體流動，不容易聚焦，靜置5-10分鐘使細胞沉底，之后在輕輕放上顯微鏡觀察，將有助于聚焦和估算細胞密度。

 

| 注意事項

1. 細胞養(yǎng)不好，可能的原因有，THP-1細胞特別依賴細胞濃度，ATCC上10 5到106每ML，是一個很高的密度，細胞少了就不太容易養(yǎng)好。

2. 細胞株的來源很重要，如直接來源于ATCC（American Type Culture Collection 美國模式菌種保藏中心）生命力要強于國內(nèi)細胞庫的。

3. 注意細胞的密度一定要高，介于5×10^5—— 10^6/mL之間，增值的快。細胞數(shù)量太少，不適合THP-1生長，一般狀態(tài)不好的THP-1在培養(yǎng)了3天后數(shù)量仍然不多，繼續(xù)培養(yǎng)一天或者兩天，培養(yǎng)基 嚴重泛黃，細胞數(shù)會增加。這一點不同于同是單核細胞系的U937細胞。

4. THP-1細胞適合在細胞Ph環(huán)境偏酸性環(huán)境生長，對培養(yǎng)基變化非常敏感，所以 盡量使用相同Ph的1640。

5. 傳代后切忌常移出培養(yǎng)箱觀察，否則會影響細胞生長，狀態(tài)變差，一般首先表現(xiàn)為細胞內(nèi)顆粒變多。一般THP-1 生長相當快，對于狀態(tài)已經(jīng)不好的情況，建議傳代后3～4天再觀察，一般4天時間培養(yǎng)基已明顯泛黃，細胞數(shù)量巨增;1)THP-1細胞喜歡酸性條件，你不要老是換培養(yǎng)基。越酸的條件，細胞密度越大，細胞就長得越好;2）不要頻繁換液，一般2-3次換液離心一次（只是補充培養(yǎng)基）3） 使用1640（ATCC推薦），注意加碳酸氫鈉2.5g就可以了，寧酸勿堿; 4）注意凍存的時候密度大些，推薦用血清凍存。

6. 復蘇比較慢，建議開始用小瓶，不要用一次性的。