現(xiàn)實是這樣的

支原體污染是細胞培養(yǎng)試驗室中最常見污染之一，保守估計常規(guī)細胞培養(yǎng)中有15~35%存在支原體污染[1]。

一被污染深似海，從此快樂是路人。

 

情況是這樣的

支原體（Mycoplasma）是一類沒有細胞壁、形狀多變、能通過濾器的可獨立生存的最小原核微生物，大小為0.1~0.3μm，可以在培養(yǎng)基中自己生存，也可以與細胞共生或胞內(nèi)寄生[2]。支原體的繁殖周期較短（1~9小時）[3]，因此，一旦污染，支原體數(shù)量會快速增長，3～5天內(nèi)能在培養(yǎng)基中達106CFU/mL。
 

支原體污染可能來自培養(yǎng)基、血清、操作人員、污染的操作環(huán)境、污染的細胞和水浴鍋交叉污染等等，但是人源的污染概率最大，數(shù)據(jù)表明80.6%的實驗人員為支原體攜帶者[4]。進而影響細胞生長率、細胞形態(tài)、基因表達、細胞代謝和細胞活力。
 

支原體污染不易被察覺，因此定期檢測和過程樣品監(jiān)測顯得非常重要，如細胞庫檢測、生產(chǎn)用細胞檢測、培養(yǎng)過程樣品污染監(jiān)測和檢定用細胞檢測，防患于未然，各個關(guān)鍵節(jié)點監(jiān)控必不可少。

 

那能怎么辦？

選用合適的方法，及時定期監(jiān)測，重要節(jié)點把控，即可！
 

目前支原體檢測方法大致分7種，主要根據(jù)支原體的特征，如培養(yǎng)基中能自由生活、個頭小、形狀多變、可附著到細胞上、有獨立的遺傳物質(zhì)且A-T含量高、有特有的呼吸代謝系統(tǒng)、有獨特的細胞組成等等來建立的檢測方法[5]。

客觀的講，每個方法都有自己的特點和優(yōu)勢，但目前主流檢測方法是培養(yǎng)法、指示細胞法、NAT方法和生化法。幾種方法特點對比如下：

大家對這幾種方法并不陌生，其中生化法是基于支原體特有的酶進行支原體檢測�；畹闹г�體溶解后釋放大量能力代謝相關(guān)酶，與底物反應(yīng)促進ADP轉(zhuǎn)化為ATP。通過熒光素酶法間接反應(yīng)樣品中添加底物前后ATP的變化，進而判斷有無支原體污染和評估污染程度。

 

生化法支原體檢測最典型的特征是能檢測活的支原體，檢測時間短。因此很多企業(yè)將該方法用于常規(guī)細胞樣品和培養(yǎng)過程樣品快速檢測，檢測陽性樣品可以借助更準確的方法進行確認，如培養(yǎng)法或者NAT方法。

 

MycoAlert支原體檢測試劑盒，20分鐘簡單快速出結(jié)果。

 

目前行業(yè)內(nèi)最經(jīng)典的生化法支原體檢測試劑盒MycoAlertTM來自Lonza。

MycoAlert™支原體試劑盒搭配Lucetta™2支原體檢測儀，可以對180多種支原體以及細胞培養(yǎng)物6大支原體污染進行快速、靈敏的污染篩查。通過對加入底物前（讀值A(chǔ)）和加入底物后（讀值B）發(fā)光變化，計算B/A比值來判斷是否為支原體污染和評估污染程度大小[6]。

產(chǎn)品特點

• 簡單快速：20分鐘拿到檢測結(jié)果
• 應(yīng)用方便：細胞上清與試劑混合，兩次讀值，計算比值即可
• 應(yīng)用廣泛：可檢測所有常規(guī)的支原體和無膽甾原體的污染，適用于多種樣品類型
• 靈敏度佳：能達到50cfu/mL靈敏度，可有效避免假陰性結(jié)果
• 多種選擇：不同規(guī)格試劑盒可供選擇
• 整體方案：試劑盒中含有實驗所需試劑，可以搭配Lucetta™2系統(tǒng)，方便使用

參考文獻：

[1]Drexler HG and Uphoff CC., 2002. Mycoplasma contamination of cellcultures: Incidence, sources, effects, detection, elimination,prevention Cytotechnol 39: 23–38

[2]Rottem S., 2003. Interaction ofmycoplasmas with host cells.2003, Physiol Rev. 83(2): 417-432.

[3]Rottem S., 2002. Invasion of Mycoplasmas into and Fusion with HostCells. In: Razin S., Herrmann R. (eds) Molecular Biology andPathogenicity of Mycoplasmas. Springer, Boston, MA

[4]NikfarjamL, Farzaneh P., 2012. Prevention and Detection of MycoplasmaContamination in Cell Culture. Cell J. 13(4):203-212

[5]加菲說檢測｜支原體檢測方法（四）賽默飛生物工藝2020-06-23

[6]MycoAlert™ mycoplasma detection kit, Mycoplasma detectionassay-Instructions for use.

https://bioscience.lonza.com/lonza_bs/CH/en/download/product/asset/30191