名稱	293T [HEK-293T] (人胚腎細(xì)胞)
形態(tài)	上皮樣
致瘤性	+
產(chǎn)物或抗原	大T抗原
生長(zhǎng)特性	貼壁細(xì)胞
營(yíng)養(yǎng)體系	DMEM（C3113-0500）+10%FBS（C04001）

來源：ATCC官網(wǎng)

 

293 [HEK-293]細(xì)胞是經(jīng)人腺病毒5（Ad5）轉(zhuǎn)染而形成的人胚腎細(xì)胞永生化細(xì)胞系，293細(xì)胞包含并表達(dá)轉(zhuǎn)染的Ad5基因。

 

293T細(xì)胞是293 [HEK-293]細(xì)胞株插入了SV40 T-antigen的溫度敏感基因形成的高轉(zhuǎn)衍生株，廣泛用于病毒包裝。其有多種衍生株，比如HEK293，293T/17等，來源都是人胚胎腎細(xì)胞，其極少表達(dá)細(xì)胞外配體所需的內(nèi)生受體，且比較容易轉(zhuǎn)染，是一個(gè)很常用的表達(dá)研究外源基因的細(xì)胞株。

 

293T細(xì)胞廣泛應(yīng)用于病毒包裝，用磷酸鈣轉(zhuǎn)染效率可高達(dá)50%。蛋白表達(dá)水平高，轉(zhuǎn)染后2-3天用堿性磷酸酶分析可較容易地檢測(cè)到表達(dá)的蛋白。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞是過表達(dá)蛋白并獲得細(xì)胞內(nèi)及細(xì)胞外（分泌的或膜上）蛋白的便捷方式。

 

 

 

細(xì) 胞 特 性  .VivaCell

1. 貼壁性差

   對(duì)貼壁因子很有要求，最好進(jìn)行包被；也可以提高血清比例來嘗試觀察一下；注意板材的親水性，細(xì)胞貼壁疏松，可只用EDTA消化，不要用胰蛋白酶過度消化。

    

2. 增殖迅速

   細(xì)胞增殖非�？�，通常倍增時(shí)間不到一天，隔天即可長(zhǎng)滿，融合率不可過高，需要及時(shí)傳代。

 

 

培 養(yǎng) 難 點(diǎn)  .VivaCell

 細(xì) 胞 聚 團(tuán) 嚴(yán) 重 

1. 為啥293T細(xì)胞傳代后聚團(tuán)嚴(yán)重？

經(jīng)傳代后嚴(yán)重聚團(tuán)的293T細(xì)胞

圖片來源于客戶僅供參考

原因推斷：胰酶消化操作不當(dāng)導(dǎo)致細(xì)胞聚團(tuán)。

• 消化過度或吹打過猛導(dǎo)致細(xì)胞受傷嚴(yán)重，破損的細(xì)胞碎片容易粘連聚團(tuán)。

• 消化時(shí)細(xì)胞融合率太高，成片脫落，將不容易被吹散，容易聚團(tuán)。

 

解決辦法：鑒于該細(xì)胞貼壁疏松，普通0.25%胰酶消化時(shí)間控制15s-30s；吹打動(dòng)作輕柔，控制在10-20次；細(xì)胞融合率達(dá)到80%傳代即可傳代，不可長(zhǎng)的太滿。

 

2. 為啥293T換了血清批次后聚團(tuán)嚴(yán)重？

換血清批次后嚴(yán)重聚團(tuán)的293T細(xì)胞

圖片來源于客戶僅供參考

 

原因推斷：血清來源于動(dòng)物，其組成成分有1000種左右，且血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏哪挲g、生理?xiàng)l件和營(yíng)養(yǎng)條件而異。每個(gè)批號(hào)的組分百分比含量都是不固定的，所以批間差異是存在的。293T細(xì)胞本身有聚團(tuán)生長(zhǎng)特性，但嚴(yán)重聚團(tuán)可能受到血清里的某些因子刺激。

 

解決辦法：先用血清試用裝，試用效果好，可購(gòu)買和血清試用裝批次相同的正裝，囤積半年或一年的用量，有效避免批間差對(duì)細(xì)胞的影響（胎牛血清在-20℃保存可達(dá)5年）。

 

 

 貼 壁 性 差 

1. 為什么用了新批號(hào)的血清，293T細(xì)胞貼壁性變差？

貼壁疏松的293T細(xì)胞

圖片來源于客戶僅供參考

原因推斷：血清存在批間差異，而293T細(xì)胞本身特點(diǎn)就是貼壁性差，對(duì)不同批次的血清適應(yīng)性不同，就容易出現(xiàn)貼壁疏松現(xiàn)象。

 

解決辦法：可適當(dāng)加高血清比例（最高不超過20%）；建議試好一個(gè)血清批次多囤一些，可以避免血清批間差對(duì)細(xì)胞的影響。

 

2. 為啥293T細(xì)胞從瓶里（例如T25）鋪板到孔里（96孔板），貼壁性變差？
 

原因推斷：排除掉瓶和孔板本身材質(zhì)或TC（親水處理）處理因素外，293T細(xì)胞貼壁性變差極有可能是因?yàn)榭臻g的隔離導(dǎo)致細(xì)胞自分泌或旁分泌產(chǎn)生的信號(hào)分子濃度太低，不利于細(xì)胞的貼壁或增殖。

 

解決辦法：在鋪板前，對(duì)孔板進(jìn)行明膠（BI：01-944）包被，可有效促進(jìn)細(xì)胞貼壁。

 

 

 轉(zhuǎn) 染 病 毒 后 細(xì) 胞 凋 亡 嚴(yán) 重 

1. 為啥293T細(xì)胞轉(zhuǎn)染病毒后凋亡嚴(yán)重？

經(jīng)病毒轉(zhuǎn)染后漂浮凋亡的293T細(xì)胞

圖片來源于客戶僅供參考

 

原因推斷：在排查了方法步驟和轉(zhuǎn)染試劑，依然沒有改善的情況下，可排查一下轉(zhuǎn)染前的營(yíng)養(yǎng)體系，尤其是血清批間差帶來的影響。很多同學(xué)說前期培養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)正常呀，其實(shí)細(xì)胞形態(tài)學(xué)只是鑒別細(xì)胞是否健康的一個(gè)外在指標(biāo)，還要結(jié)合細(xì)胞其它指標(biāo)對(duì)細(xì)胞健康進(jìn)行評(píng)定（比如倍增時(shí)間，存活率）。

 

解決辦法：通過更換血清批次，再進(jìn)行轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)并觀察轉(zhuǎn)染后的效果，比較分析出原因。

 

 

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