您是否總是遇到細胞抱團的現(xiàn)象？

您是否總是因為搞不清楚細胞抱團原因而困惑？

您是否總是因為難以將抱團細胞拯救回來而抓狂？

伙伴們，我來拯救你們的細胞了，今天我給大家從四個層面剖析細胞抱團的真實原因，快來圍觀吧！

 

Ⅰ

# 細胞本身生長特性有抱團傾向 #

 

有些細胞本身有抱團生長的特性，給大家看5種喜歡抱團的細胞類型：
 

細胞類型①：NCI-H716 人結直腸腺癌細胞

形態(tài)：淋巴母細胞樣

生長特性：懸浮生長

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細胞喜歡在懸浮液中呈葡萄狀聚集，抱團細胞粒粒飽滿

 

細胞類型②：Caco-2人結直腸腺癌細胞

形態(tài)：上皮樣

生長特性：貼壁生長

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此細胞喜歡貼壁成片分布，呈融合狀，細胞個頭大小不勻

 

細胞類型③：CaLu-3 人肺癌細胞

形態(tài)：上皮樣

生長特性：貼壁生長

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此細胞也是喜歡聚集分布，呈片狀，片狀之間有空白

 

 

細胞類型④：SH-SY5Y人神經(jīng)母細胞瘤細胞

形態(tài)：上皮樣

生長特性：貼壁和懸浮生長

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此細胞貼壁居多，有輕微的抱團傾向

 

細胞類型⑤：BT-474人乳腺癌細胞

形態(tài)：上皮樣

生長特性：貼壁、片狀生長

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此細胞也是喜歡片狀生長

 

 

看了這么多喜歡抱團的細胞類型，也會有喜歡分散生長的細胞類型吧，來給大家展示2種細胞類型：
 

細胞類型①：MSC（人源脂肪來源）

形態(tài)：成纖維樣

生長特性：貼壁生長

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此細胞成纖維樣，均勻分布，平鋪皿底，不留空隙

 

 

細胞類型②：HEF小兒包皮成纖維細胞（人源脂肪來源）

形態(tài)：成纖維樣

生長特性：貼壁生長

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此細胞也是喜歡分散生長，均勻分布

 

 

看了這些細胞形態(tài)，不知您是否和我有一個共鳴：大多數(shù)上皮樣或神經(jīng)母細胞瘤樣的細胞更喜歡抱團生長，而大多數(shù)成纖維樣細胞更喜歡分散、均勻生長。

 

又有一個問題來了，那就是我們?nèi)绾螀^(qū)分細胞抱團正不正常。

這里開始劃重點了，大家看好了：

    1.  如果細胞本身是分散生長，結果抱團嚴重，說明細胞“生病”了，我們要給細胞“診治”。

    2.  如果本身生長特性就有抱團的細胞，如何判斷它的抱團正不正常呢？

 

獨門秘訣告訴您，細胞哪怕是抱團了，也是“粒粒飽滿，棱角分明”的，回頭看看上面抱團的細胞，是不是細胞之間有明確的“分界線”，這說明它們抱在一起很健康，很Happy；而異常的細胞抱團，你是觀察不到細胞之間的“界限”的，細胞形態(tài)也不規(guī)則，邊緣模糊，遠遠看去，抱團的細胞像“一團漿糊”。

 

 

Ⅱ

# 細胞老化更容易抱團 #

細胞類型：MSC(人源臍帶來源第6代）

形態(tài)：成纖維樣

生長特性：貼壁生長

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如圖所示：

人臍帶來源第6代的間充質(zhì)干細胞，白色箭頭指示的是發(fā)生細胞老化的MSC細胞，β-半乳糖苷酶染色陽性，染上藍色。

由圖片可以看出老化細胞體積增大、細胞扁平。白圈圈起來的是聚團細胞，老化細胞容易聚團生長，狀態(tài)變差。

 

 

Ⅲ

# 血清批間差可能導致細胞抱團 #

那么問題來了，血清為何有批間差？

因為血清來源于動物，其組成成分有1000種左右，且血清組成及含量常隨供血動物的年齡、生理條件和營養(yǎng)條件而異。每個批號的組分百分比含量都是不固定的，所以批間差異是存在的。

H9c2 低密度正常形態(tài)

舊批次血清

H9c2 低密度抱團形態(tài)

新批次血清

舊批次血清

H9c2高密度異常形態(tài)

新批次血清

圖源客戶，僅供參考學習用

 

血清批間差可能會導致細胞抱團。

如圖所示，大鼠心肌細胞在更換了新批次的血清之后，隨著傳代次數(shù)的增加，抱團明顯。正常低密度下，細胞舒展開來，均勻分散，但異常的的細胞會呈現(xiàn)聚集生長狀態(tài)，高密度下正常細胞像鋪路石一樣均勻鋪滿，不留空隙，但高密度下異常的細胞，形態(tài)模糊，難以辨認，像四川九寨溝一樣的溝壑重生。

 

Ⅳ

# 胰酶消化不當容易導致細胞抱團 #

HEK293細胞

 

導致細胞抱團的第一種情況是胰酶消化操作不當。

如果您經(jīng)常遇到傳代的細胞貼壁后老是貼壁不勻，成片分布，抱團生長，來看看你有沒有注意這幾個細節(jié)噢。

1.  如圖所示，HEK 293因消化過度或吹打過猛導致細胞受傷嚴重，破損的細胞碎片容易粘連抱團；
2.  消化時細胞融合率太高，成片脫落，將不容易被吹散，容易抱團，我們建議細胞融合率達到80%傳代為佳；
3.  吹打力度不足，難以將成片脫落的細胞吹散，容易抱團。  

導致細胞抱團的第二種情況是細胞對胰酶消化強度和純度的敏感性。

1.  細胞對胰酶消化強度的敏感性。絕大多數(shù)細胞都可以適應普通胰酶（貨號：03-050-1B：0.25%胰蛋白酶,0.02%EDTA）。這里的EDTA能螯合掉培養(yǎng)液中的Ca²⁺、Mg²⁺，加快細胞與皿底以及細胞之間的分離速度。但有極少部分細胞對胰酶消化強度很敏感，需要不含EDTA的胰蛋白酶（貨號：03-046-1B：0.025%胰蛋白酶,不含EDTA），例如：大鼠肺泡二型上皮細胞。
2.  細胞對胰酶純度的敏感性。胰蛋白酶主要是從豬的胰臟提取，純化獲得的結晶，再制成的凍干制劑。正是因為其是提取物，故純度無法媲美重組胰酶，含有的雜酶比如羧肽酶對細胞有傷害，敏感的細胞類型如神經(jīng)元類：小鼠海馬神經(jīng)元HT22；干細胞類：胚干，誘導干；間充質(zhì)干需要用重組胰酶（貨號：03-079-1B）消化。  

我們可以看一個例子：

用重組胰酶和普通含EDTA的0.25%胰酶消化間充質(zhì)干細胞，重組胰酶消化的細胞生長分布均勻，狀態(tài)良好，形態(tài)飽滿，邊緣清晰；而普通胰酶消化的細胞則明顯抱團，狀態(tài)很差，形態(tài)扁平，邊緣迷糊，并形成大小不一的孔狀。所以如果您養(yǎng)的細胞出現(xiàn)抱團，不妨嘗試一下重組胰酶哦。

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本期講解就到這里了，關于細胞抱團，是不是戳中了您養(yǎng)的細胞抱團的一種可能？

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