各位老師在進行細胞培養(yǎng)實驗的時候會不會很好奇 “要怎么判斷細胞是死是活呢？它們活的好嗎?”
逍鵬生物手把手來教您如何進行判斷。

可以簡單將分析細胞活力和增殖測定的方法分成5大類：
●   代謝增殖測定
●   DNA合成增殖實驗
●   化學發(fā)光細胞活性測定
●   熒光染料增殖實驗
●   臺盼藍細胞計數(shù)
以下簡單介紹這些分類的幾種常見實驗方式吧！

 

代謝增殖測定

MTT檢測法
活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶，能使額外添加的MTT還原為不溶于水的藍紫色結晶甲瓚（Formazan），并沉積在細胞中，死細胞則無此現(xiàn)象。接著用二甲基亞砜（DMSO）溶解沉積在細胞中的甲瓚后，可利用酶標儀490nm波長測光吸收值，依據(jù)吸光值（OD值）計算出活細胞數(shù)量。在一定細胞數(shù)范圍內，吸光值與細胞活性成正比。
 

△ 圖例

 

XTT檢測法
與MTT原理相似，皆是利用添加物與活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶反應，并利用酶標儀測定產物光吸收值；不同于MTT法的是，XTT法還原產物是水溶性的橙黃色甲肷，不需經過二甲基亞砜（DMSO）溶解步驟，即可直接測定光吸收值（BI，貨號：20-300-1000），操作較MTT方便快速。當XTT與電子耦合劑作用后產生的水溶性甲肷吸光值與活細胞數(shù)成正比。

△ 圖例

 

DNA合成增殖實驗

BrdU檢測法
BrdU為胸腺嘧啶核苷（Thymine）的衍生物，可用于標記活細胞中新合成的DNA（細胞活性周期S期），BrdU可隨著DNA復制進入子細胞，因此在加入BrdU后分裂增殖的細胞DNA都會帶有BrdU標記，可通過抗BrdU單克隆抗體檢測，借此檢測細胞的增殖能力，但BrdU單克隆抗體檢測過程需要將部分DNA變性，使部分雙股解開成單股才能順利檢測。且BrdU為光敏性，因此需要在光線刺激較低（黑暗）的環(huán)境下操作，并避光培養(yǎng)。

△ 圖例

 

EdU檢測法
EdU原理跟BrdU檢測法很像，都是代替胸腺嘧啶（Thymine，T）滲入正在復制的DNA中，并加入能與EdU反應的熒光染料，即可利用檢測熒光值偵測細胞增殖，或在細胞組織級別作為標記追蹤等研究，實驗過程不需要經過BrdU檢測法的DNA變性處理。

△ 圖例

 

化學發(fā)光細胞活性測定

ATP發(fā)光法
ATP是細胞的能量直接來源，ATP發(fā)光法是通過檢測細胞內ATP含量來分析細胞增殖。市面上的原理是利用外源的螢火蟲熒光素（Luciferin）與熒光素酶（Luciferase），以細胞內含的ATP為能量來源，發(fā)生氧化反應產生生物冷光，因此可通過監(jiān)測冷光光度，來對應ATP含量并判斷細胞增殖狀況。

△ 圖例

 

熒光染料增殖實驗

CFSE檢測法
CFSE是一種可穿透細胞膜的熒光染料，具有細胞膜通透性，能夠自由進入細胞；當CFSE擴散穿過細胞膜，會與細胞內源酯酶產生水解反應而被激發(fā)，發(fā)出綠色熒光，這些帶熒光的CFSE會進一步與細胞骨架蛋白結合，形成穩(wěn)定的胞內熒光蛋白。每當細胞進行分裂增殖，胞內熒光蛋白會被平均分配到下一代細胞中，因此細胞熒光強度會隨著增殖代數(shù)增加而不斷地降低，可用流式細胞儀進一步檢測分析得出細胞分裂增殖的情況。CFSE的濃度，對于最終判斷細胞增殖結果有直接性的影響。

△ 圖例

 

臺盼藍細胞計數(shù)

臺盼藍（Trypan Blue）計數(shù)法
臺盼藍（BI，貨號：03-102-1B）是一種藍色細胞活性染料，無法通過結構完整的細胞膜進入細胞內部；但細胞死后，喪失細胞膜穩(wěn)定性，臺盼藍會進入細胞將細胞染成藍色，因此在細胞實驗中，常規(guī)地搭配自動細胞計數(shù)儀或血球計數(shù)板，應用于分辨活細胞和死細胞、及檢測細胞膜的完整性。

△ 圖例

 

Orangu™細胞計數(shù)

Orangu™計數(shù)法
Orangu™ solution（Cell Guidance，貨號：OR01-500）是一種無細胞毒性、高靈敏度、比色法，用于測定細胞增殖和細胞毒性的細胞活性試劑。利用WST-8（細胞代謝的一種水溶性的四唑鹽）在細胞內線粒體脫氫酶作為電子介質的情況下，它被還原為橙色的甲瓚染料，且產生甲瓚染料的數(shù)量與活細胞的數(shù)量和培養(yǎng)時間成正比。操作簡單快速，結果可重復。

△ 圖例
 

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