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高通量PCR/qPCR體系構(gòu)建新方法和新應(yīng)用

瀏覽次數(shù):3776 發(fā)布日期:2021-5-18  來源:騰泉生物
PCR/qPCR技術(shù)廣泛應(yīng)用于各種分子生物學檢測領(lǐng)域。疫情之下,高通量的PCR檢測需求日趨上升,為了解決手工移液操作的失誤風險和操作難度,SPT Labtech公司的mosquitodragonfly discovery液體工作站以超高精度的液體處理能力配合檢測試劑盒的優(yōu)秀性能,可以將PCR技術(shù)應(yīng)用到更高密度的檢測模式中,適應(yīng)如今的檢測需求和通量。
mosquito LV
25 to 1200 nL
mosquito HV
500 nL to 5 mL
dragonfly
200 nL to 4 mL
 
一、移液精準可重復性高
在PCR和qPCR加樣過程中,尤其在配置96孔或者384孔反應(yīng)板時,采用高通量高精度的自動化移液系統(tǒng)來進行實驗體系構(gòu)建,可以避免在高壓工作下人工疲勞操作帶來的不均一性,減小實驗誤差,并提高樣本處理效率。
mosquito和dragonfly discovery獨有的固相置換技術(shù),可以無視液體粘度和表面張力進行精準加樣,對于不同的液體如PEG、乙醇或gDNA都無需調(diào)整液體參數(shù),在1uL加樣下,CV值<3%。
固相置換技術(shù):8/16通道接觸式移液(左:mosquito);多通道非接觸式分液(右:dragonfly discovery)
 
二、用更少的試劑樣本做更多實驗
PCR實驗體系的微縮化可以幫助研究人員降低試劑使用的成本。更重要的是,對于一些珍貴樣本(比如來自患者的臨床樣本,或者樣本庫的存檔樣本),它們往往具有很高的臨床價值但是總量非常稀少,實驗體系的微縮化能有效節(jié)省樣本用量,使得這些樣本可以進行多次分析。
使用mosquitodragonfly discovery進行PCR、qPCR體系建立,可以將常規(guī)的反應(yīng)體積從25μL降低至2μL,并且對實驗結(jié)果沒有任何影響。
小體積分液(左:mosquito,右:dragonfly discovery)
 
三、快速制備反應(yīng)體系
mosquito和dragonfly discovery移液速度非?。使用mosquito進行一塊384孔板的移液只需要3分鐘,使用dragonfly discovery進行一塊384孔板的試劑分液只需要30秒。并且軟件操作界面簡潔友好,操作十分簡便。
圖片
PCR/qPCR體系構(gòu)建流程
 
1、應(yīng)用案例1
由于mosquitodragonfly discovery的小體系加樣非常精準,可以輕松地將常規(guī)PCR體系從40μL微縮化到了2uL,同時保證了實驗結(jié)果的靈敏度和特異性。
圖:將反應(yīng)體系微縮化到了2uL, 在保持DNA模板不變的情況下,摸索了微縮化后各個組分試劑的用量
圖片
圖:將反應(yīng)體系微縮化到了2uL, 并同時摸索了模板DNA和其他試劑的用量,把樣本起始量降低到了40pg
2、應(yīng)用案例2
分別使用mosquito LVmosquito HV、dragonfly discovery制備qPCR反應(yīng)體系(KAPA SYBR FAST qPCR Master Mix (2X) Universal)。實驗結(jié)果表明,在反應(yīng)體系減少15倍的情況下,依然獲得了精確且重復性高的結(jié)果。
圖片
對于mosquito HV,單獨添加每種試劑成功將化體系微縮化至1.5μL (下圖A, Ct=20.90; CV=0.2),預(yù)混試劑后加樣成功微縮化至1μL (下圖B,Ct=25.68; CV=0.7)。對于mosquito LV,不論單獨添加每種試劑或預(yù)混后加樣,均將總體系降低至0.6μL (下圖C, Ct=18.04; CV=1.7; 下圖D, Ct=25.44;CV=0.9)。使用dragonfly discovery建立微縮化qPCR體系,單獨添加每種試劑時總體系為0.8μL (下圖E, Ct=18.27; CV=1.5),預(yù)混試劑加樣時總體系為0.6μL (下圖F, Ct=25.92; CV=0.8)。
圖片
qPCR擴增曲線
3、應(yīng)用案例3
馬里蘭大學基因組學服務(wù)實驗室使用CDC推薦的COVID-19檢測方法,搭配SPT Labtech mosquito HV和dragonfly discovery液體處理工作站進行自動化qPCR體系建立,建立了大規(guī)?焖贆z測平臺,為抗擊新冠肺炎疫情做出貢獻。每天可進行多達20000次檢測,極大地增加了檢測通量和效率。
圖:新冠病毒檢測workflow
圖:mosquito和dragonfly discovery體積小巧,可以輕松的整合在各類層流罩或超凈臺中,節(jié)約實驗室空間
 
使用mosquitodragonfly discovery進行微縮化、自動化的PCR體系建立,相比于手工移液操作,具有極大的優(yōu)勢:
▪ 提高實驗通量(在384孔板中建立PCR反應(yīng)體系,日檢測通量達到20000個/天)
▪ 減少樣本和試劑用量從而節(jié)約成本(微縮化PCR/qPCR體系至2μL)
▪ 提高流程的標準化和可重復性(減少人為操作帶來的實驗誤差)
▪ 一次性耗材有效降低交叉污染風險(槍頭經(jīng)過除酶滅菌處理)
▪ 工作站體積小巧易于整合(可整合機械臂、大型工作站、層流罩)
來源:SPT Labtech
聯(lián)系電話:400-151-8616
E-mail:marketing@sptlabtech.cn

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