1. 長(zhǎng)肽合成技術(shù)：
在現(xiàn)代生物學(xué)研究中，經(jīng)常會(huì)用到序列比較長(zhǎng)的多肽，對(duì)于序列中含有60個(gè)以上氨基酸的多肽，通常會(huì)采用基因表達(dá)及SDS-PAGE法來獲得，但是這種方法周期長(zhǎng)，最終產(chǎn)物分離效果差等，使固相法長(zhǎng)肽合成技術(shù)成為一種需要。肽谷生物經(jīng)過長(zhǎng)期的摸索與積累，對(duì)合成工藝及方法不斷優(yōu)化，解決了長(zhǎng)肽合成難，純化難的問題，我們長(zhǎng)肽合成成功率高，質(zhì)量穩(wěn)定。

1. 長(zhǎng)肽合成面臨的困難及解決辦法

長(zhǎng)肽合成中，我們一直面臨一個(gè)矛盾，即合成中隨著序列的增長(zhǎng)，縮合反應(yīng)空間位阻增大，為了反應(yīng)完全，需要增加反應(yīng)時(shí)間；但是隨著反應(yīng)時(shí)間的延長(zhǎng)，其產(chǎn)生的副反應(yīng)就越多， 一些缺殘基的目標(biāo)肽就隨之產(chǎn)生。這些缺殘基的肽鏈也是長(zhǎng)肽合成過程中所產(chǎn)生的主要雜質(zhì)。 因此，長(zhǎng)肽的合成過程中，我們需要克服的主要困難是探索更優(yōu)質(zhì)的反應(yīng)條件和反應(yīng)方法，從而使氨基酸縮合反應(yīng)進(jìn)行的更充分更徹底。同時(shí)縮短反應(yīng)時(shí)間，因?yàn)榉磻?yīng)時(shí)間越長(zhǎng)，不可控的副反應(yīng)相對(duì)的就越多，副產(chǎn)物就越復(fù)雜。

為此，肽谷生物經(jīng)過多年的摸索與積累，總結(jié)出以下經(jīng)驗(yàn)：
(1) 對(duì)于反應(yīng)時(shí)間實(shí)行精準(zhǔn)靈活的把控：我們?cè)诙嚯暮铣啥嗄甑慕?jīng)驗(yàn)積累，使得我們對(duì)于多肽反應(yīng)時(shí)間能夠精準(zhǔn)把控，在反應(yīng)完全-減少副產(chǎn)物上能夠找到平衡點(diǎn)；
(2) 采用微波合成法：對(duì)于合成過程中出現(xiàn)的一些難以縮合的氨基酸，我們采用微波法進(jìn)行合成，該方法效果顯著，并且大大縮短了反應(yīng)時(shí)間，同時(shí)減少了兩種主要副產(chǎn)物的產(chǎn)生。
(3) 采用片段合成法：當(dāng)某些多肽用常規(guī)合成方法合成困難，并且難以純化時(shí)，我們也會(huì)采用將多肽中某一段的某幾個(gè)氨基酸縮合之后作為一個(gè)整體縮合到肽鏈上去，這種方法也能夠解決許多合成中存在的問題。
(4) 采用酰肼合成法：酰肼法合成多肽的方法是固相合成的N末端Cys多肽和C末端多肽酰肼之間的化學(xué)選擇性反應(yīng)形成酰胺鍵而實(shí)現(xiàn)多肽連接的方法。該方法根據(jù)肽鏈中Cys的位置，將整條肽鏈分成多條序列分別合成，最終經(jīng)過液相合縮反應(yīng)得到目標(biāo)肽， 該方法不僅大大縮短了長(zhǎng)肽合成時(shí)間，而且顯著地提高了最終產(chǎn)物純度，因此廣泛適用于含有Cys的長(zhǎng)鏈多肽的合成。

長(zhǎng)肽純化
長(zhǎng)肽的特殊性不可避免的導(dǎo)致最后得到的粗品肽組分復(fù)雜，因此，對(duì)于長(zhǎng)肽的HPLC純化也是一項(xiàng)挑戰(zhàn)；我們通過在amyloid系列多肽純化過程中，吸取大量經(jīng)驗(yàn)并成功用于長(zhǎng)肽純化，我們通過采用先進(jìn)儀器，多純化體系混用，反復(fù)分離等經(jīng)驗(yàn)手段，極大提升了我們長(zhǎng)肽純化成功率。

2. 難溶多肽合成技術(shù)
在我們多肽生產(chǎn)純化過程中，經(jīng)常會(huì)遇到難溶的序列，這導(dǎo)致了眾多多肽公司多肽成產(chǎn)過程中收率低，難純化，成品純度不合格甚至多肽生產(chǎn)失敗等后果，這種難溶性與多肽自身的氨基酸組成及序列有密切關(guān)系，我們?cè)诙嚯念I(lǐng)域內(nèi)長(zhǎng)期深入的研究，讓我們積累了大量的寶貴經(jīng)驗(yàn)，保證我對(duì)于難溶肽的溶解純化保持很高的成功率和產(chǎn)品質(zhì)量。

我們對(duì)于難溶肽的溶解總結(jié)出以下幾點(diǎn)：
(1) 通常整體顯酸性的多肽溶解困難時(shí)可以加入適量的堿性溶液，而顯堿性的多肽溶解困難時(shí)可以加入適量的酸性溶液;。
(2) 序列中含有大量疏水性氨基酸或中性氨基酸時(shí)，難于直接溶于水，通常需要先加入少量有機(jī)溶劑，溶解完全后用蒸餾水大量稀釋，常用的有機(jī)溶劑有乙腈，DMSO，DMF，丙醇，異丙醇等;
(3) 當(dāng)肽鏈中含有Met或者Cys時(shí)，不能用DMSO溶解，因?yàn)镈MSO有氧化性，這很可能會(huì)導(dǎo)致肽鏈中含有的S被氧化;
(4) 專肽專柱：我們?cè)陂_發(fā)Amyloid系列產(chǎn)品的過程中，發(fā)現(xiàn)用DMOS溶解的產(chǎn)品純化后使用的純化柱基本就不能用于其他產(chǎn)品的純化，為了保證Amyloid產(chǎn)品的穩(wěn)定，我們對(duì)于Amyloid等類似產(chǎn)品都配用了專門的純化柱。

在不影響您實(shí)驗(yàn)需求的情況下，也可以針對(duì)肽鏈的物理性質(zhì)，化學(xué)性質(zhì)和分子結(jié)構(gòu)，對(duì)多肽進(jìn)行修飾改變，增加其溶解性，以下是我們的建議：
(1) 修飾肽鏈中C端和N端：對(duì)于酸性肽，我們推薦C端乙�；�修飾;對(duì)于堿性肽，我們推薦N端氨基化修飾;
(2) 修改肽鏈中的氨基酸序列：某些序列存在大量的連續(xù)的疏水性氨基酸，例如W, F, V,I, L, M, Y ,這些疏水氨基酸在序列中大量或者連續(xù)重復(fù)出現(xiàn)時(shí)，整條肽鏈通常是難溶的，為了增強(qiáng)肽的極性和親水性，我們建議客戶在不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上，延長(zhǎng)序列，或者通過減少疏水性氨基酸的個(gè)數(shù)來增加溶解性。
(3) 替換序列中疏水性氨基酸的殘基：在不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上，用可溶性的氨基酸替代序列中的疏水性氨基酸可以達(dá)到增加溶解度的效果。我們通常用Gly, Ala來替換疏水性氨基酸，一般都會(huì)取得比較好的溶解效果，這也是一種保守但有效的增強(qiáng)多肽溶解度的方法。