細(xì)胞為啥總是一言不合就抱團(tuán)生長(zhǎng)？！

是細(xì)胞污染了還是正�，F(xiàn)象？

是消化不好了還是鋪板有問題？

抱團(tuán)細(xì)胞越來越多，怎么樣才能讓細(xì)胞分開生長(zhǎng)？

請(qǐng)認(rèn)真閱讀以下干貨，看看能否幫您答疑解惑！

一、細(xì)胞抱團(tuán)一定代表細(xì)胞狀態(tài)不好嗎？

細(xì)胞生長(zhǎng)的時(shí)候肯定是要相互聯(lián)系，大部分的細(xì)胞都是要成片生長(zhǎng)的，應(yīng)該仔細(xì)觀察每種細(xì)胞的狀態(tài)，抱團(tuán)并不一定代表不好：

1. 若細(xì)胞輪廓清晰，可看清楚一個(gè)個(gè)的細(xì)胞，像葡萄一樣，一串串的，是狀態(tài)好的，說明細(xì)胞在分裂。

2. 但大部分細(xì)胞抱團(tuán)絕對(duì)不是一件好事！如果輪廓消失，出現(xiàn)細(xì)胞融解或細(xì)胞變灰暗、透光性變差，就是細(xì)胞死亡了。葡萄狀和抱團(tuán)，在鏡下其實(shí)很容易區(qū)別。抱團(tuán)死亡的細(xì)胞可以看到細(xì)胞碎片，如下圖：

   

   ▲ 細(xì)胞抱團(tuán)

3. 細(xì)胞抱團(tuán)是因?yàn)榧?xì)胞污染了嗎？一般細(xì)胞培養(yǎng)液清亮，就不是污染。如果是污染了的話，可以通過觀察培養(yǎng)液顏色，若污染，則很渾濁。

1. 細(xì)胞死亡釋放出DNA，纏繞其他細(xì)胞，形成黏性的細(xì)胞團(tuán)（消化的過程可能過于粗暴，吹打太用力，消化太久，消化液太強(qiáng)或有毒性等）。

2. 細(xì)胞離心速度過大或時(shí)間太長(zhǎng)。

3. 消化不完全的時(shí)候，細(xì)胞和細(xì)胞之間的連接沒有分開；消化過度的時(shí)候，圓形的細(xì)胞容易聚堆，再分開很困難！

4. 狀態(tài)不好、老化的細(xì)胞，也可能會(huì)出現(xiàn)抱團(tuán)生長(zhǎng)的情況（比如換液不及時(shí)、長(zhǎng)的太滿才傳代、污染等造成的細(xì)胞狀態(tài)差）。

5. 傳代時(shí)沒有吹打均勻，細(xì)胞團(tuán)多，培養(yǎng)時(shí)就會(huì)是一團(tuán)一團(tuán)的。

6. 傳代后細(xì)胞鋪板不均勻。

7. 有可能是雜細(xì)胞，或者死細(xì)胞。

8. 接種不均勻，或者是細(xì)胞未消化開。

9. 非震蕩培養(yǎng)或細(xì)菌（胞）量過多的話就會(huì)成團(tuán)。

1. 用無(wú)鈣鎂平衡鹽溶液洗滌細(xì)胞。

2. 對(duì)于貼壁非常牢固的細(xì)胞（如MDCK），為了細(xì)胞更好的狀態(tài)，更漂亮的樣子，建議分多批多次消化，這樣才能最大限度地降低胰酶對(duì)細(xì)胞的損傷，保證細(xì)胞的狀態(tài)能夠最優(yōu)。

3. 細(xì)胞生長(zhǎng)密度不要太高，70%－80％就好（細(xì)胞剛剛基本成單層細(xì)胞，沒有出現(xiàn)成層生長(zhǎng)），這樣細(xì)胞抱團(tuán)的幾率就大大減少了。如果細(xì)胞已經(jīng)長(zhǎng)成集落，可先將細(xì)胞低密度傳代，第二天再消化傳代，這樣連續(xù)傳三次，細(xì)胞抱團(tuán)就會(huì)越來越小，這樣幾代過后，再按照常規(guī)消化方法和時(shí)間能將細(xì)胞逐漸傳成單個(gè)的。

4. 消化過程中最好不要使勁搖動(dòng)培養(yǎng)瓶，這樣細(xì)胞特別容易成屑樣脫落。細(xì)胞一旦脫落入懸液里就很難再將他吹打成單個(gè)（因?yàn)榧?xì)胞沒有受力點(diǎn)了，所以細(xì)胞很難分散開）。所以必須要在細(xì)胞未脫落之前將其吹打開，嚴(yán)格控制好消化程度。

1. 如果細(xì)胞抱團(tuán)不影響生長(zhǎng)就沒問題，只是計(jì)數(shù)時(shí)較麻煩。在消化時(shí)，可在細(xì)胞由多角形變成圓型之前，用手輕磕培養(yǎng)瓶的側(cè)壁，使細(xì)胞從壁上脫落（最好不要吹打，對(duì)細(xì)胞形狀和生長(zhǎng)都不好）。 

2. 如果感覺有死細(xì)胞的DNA，在細(xì)胞懸液中加入幾滴無(wú)菌的DNAse（1mg/ml溶于水）將DNA鏈打斷。輕柔地吹打細(xì)胞，防止對(duì)細(xì)胞膜造成物理?yè)p傷。

3. 如果細(xì)胞抱團(tuán)是肉眼可見的，可讓細(xì)胞靜置半分鐘左右，然后吸取上半部分沒有抱團(tuán)的細(xì)胞懸液來傳代。如果細(xì)胞抱團(tuán)肉眼不可見，目前還沒有特別好的分離方法，只能等細(xì)胞狀態(tài)改善后將這部分細(xì)胞慢慢排除出去。

引起細(xì)胞抱團(tuán)的根本原因是細(xì)胞狀態(tài)變差，且在吹打細(xì)胞的時(shí)候，那些狀態(tài)好的細(xì)胞也會(huì)因?yàn)槎啻未荡蚨�受損，所以我們認(rèn)為最根本的解決方法是摸透培養(yǎng)的細(xì)胞的生長(zhǎng)習(xí)性，讓細(xì)胞保持較好的生長(zhǎng)狀態(tài)。
 

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