Horizon HD-BioP3主要特征
 

（1）知識產(chǎn)權(quán)明確：覆蓋質(zhì)粒，細(xì)胞，基因編輯技術(shù)，無后顧之憂

（2）遺傳背景清晰：基因工程技術(shù)路線成熟，位點特異，全基因組測序結(jié)果公開

（3）可追溯性強：生產(chǎn)歷史清晰，外源致病因子/GS功能/病毒檢測完善，cGMP保存記錄標(biāo)準(zhǔn)完整

（4）生產(chǎn)穩(wěn)定：在無需任何優(yōu)化的情況下混合克隆1~1.5克/升以上，單克隆2~3克/升以上，優(yōu)化后表現(xiàn)可達7~9克/升

（5）兼容性好：無綁定銷售，適應(yīng)于多種商業(yè)化的、化學(xué)定義的、無動物成分的培養(yǎng)基

（6）商業(yè)授權(quán)靈活：多種授權(quán)方式，支持與CRO/CDMO合作

（7）全球廣泛認(rèn)可：全球70多家藥物研發(fā)機構(gòu)授權(quán)使用，6個藥物獲批美國FDA IND申報（2018年第一個）

谷氨酰胺合成酶（GS）缺失的CHO-K1設(shè)計原理
·谷氨酰胺是細(xì)胞必須氨基酸；谷氨酰胺合成酶 （GS） 是一種催化谷氨酸和氨產(chǎn)生谷氨酰胺的酶，是細(xì)胞中谷氨酰胺產(chǎn)生的唯一途徑；谷氨酰胺合成酶（GS）功能缺失的情況下，細(xì)胞依賴外源性谷氨酰胺存活
·蛋氨酸硫氧胺（MSX）常被用于抑制谷氨酰胺合成酶（GS），然而蛋氨酸硫氧胺（MSX）具有毒性，在后期藥物生產(chǎn)過程中是不能使用的，相比利用MSX進行的篩選，使用無谷氨酰胺合成酶（GS）的細(xì)胞能提高篩選的效率，提高蛋白產(chǎn)量，可實現(xiàn)一步篩選獲得高產(chǎn)細(xì)胞克隆的目標(biāo)
·表達重組蛋白和外源的谷氨酰胺合成酶（GS）的質(zhì)粒載體可穩(wěn)定轉(zhuǎn)染進無內(nèi)源谷氨酰胺合成酶(GS)的細(xì)胞，去除對培養(yǎng)基中添加谷氨酰胺的依賴；通過無谷氨酰胺的培養(yǎng)基富集成功轉(zhuǎn)染的陽性細(xì)胞，從而達到陽性細(xì)胞篩選的目的
·因此谷氨酰胺合成酶（GS）篩選法是目前行業(yè)生產(chǎn)蛋白藥的首選技術(shù)平臺

基因敲除功能驗證

當(dāng)轉(zhuǎn)移到缺乏谷氨酰胺的培養(yǎng)基中時，野生型CHO細(xì)胞仍然存活，而GS-/-細(xì)胞無法存活。然而，當(dāng)轉(zhuǎn)移到補充了4mM谷氨酰胺的培養(yǎng)基中時，兩個細(xì)胞系的生長速度相當(dāng)。
Horizon的GS敲除 CHO K1細(xì)胞正在全球超過15個機構(gòu)中進行獨立評估。其中一些評估結(jié)果使得我們已經(jīng)獲得部分可用于分享的重組蛋白表達相關(guān)的細(xì)胞工藝開發(fā)數(shù)據(jù)，包括單克隆抗體和雙特異性抗體。盡管現(xiàn)階段在培養(yǎng)過程中仍在進行大量優(yōu)化，但我們始終一直在收到超過預(yù)期的表達報告。

HD-BIOP3與野生型CHOK1細(xì)胞對比

轉(zhuǎn)染含有單克隆抗體GS表達載體后，將細(xì)胞培養(yǎng)在無谷氨酰胺的培養(yǎng)基中篩選，相比于通過MSX篩選的野生型CHO K1細(xì)胞系統(tǒng)，GS缺失的細(xì)胞表達顯著提高的蛋白產(chǎn)量。此數(shù)據(jù)來自于在5L反應(yīng)器中的穩(wěn)定混合克隆庫的表現(xiàn)。

穩(wěn)定的混合庫表達
 

不同載體細(xì)胞表現(xiàn)測試，細(xì)胞轉(zhuǎn)染了一個單克隆抗體的質(zhì)粒，該質(zhì)粒載體包含了來自ProteoNic的UnicTM元件。對穩(wěn)定的混合克隆進行補料培養(yǎng)，可延長細(xì)胞的培養(yǎng)時間，同時維持一個較好的VCD。在穩(wěn)定的混合克隆，生物仿制藥IgG的表達量可達 2g/L以上。

單克隆表達
 

對來自于上面穩(wěn)定的混合克隆庫的400個單克隆細(xì)胞進行篩選和產(chǎn)量評估。3個克隆的表達量在>5g/L 。該項目未經(jīng)任何優(yōu)化的過程，后期優(yōu)化后將獲得更加表現(xiàn)。