今天,百螢為大家?guī)淼氖怯糜诩毎徒M織中低豐度靶標(biāo)的高分辨率成像技術(shù)。TSA/PSA是一種成熟的細胞信號放大技術(shù),當(dāng)TSA/PSA與我們光穩(wěn)定性、水溶性卓越的iFluor染料結(jié)合后,產(chǎn)生的熒光信號具有比傳統(tǒng)免疫組織化學(xué)、免疫細胞化學(xué)和免疫熒光方法產(chǎn)生的信號更高的精確度和靈敏度。PSA是美國AAT Bioquest自主研發(fā)的與TSA功能類似的信號放大方法,其熒光信號強度比廣泛使用的tyramide(TSA)試劑高10-50倍。感興趣的朋友一起來看看吧!
TSA/PSA原理
酪胺信號放大(TSA)是一種基于辣根過氧化酶(HRP)的催化活性對靶蛋白或核酸進行高密度原位標(biāo)記的酶學(xué)檢測方法。原理為酪胺Tyramide的過氧化物酶反應(yīng)(已標(biāo)記熒光的酪胺在HRP催化H₂O₂下形成共價鍵結(jié)合位點)產(chǎn)生的大量酶促產(chǎn)物與目標(biāo)蛋白的酪氨酸殘基共價結(jié)合,從而使目標(biāo)蛋白標(biāo)記上特異的熒光或生物素。
圖1.TSA/PSA原理及工作流程圖。通過類似于傳統(tǒng)ICC和IHC方法的工作流程,TSA/PSA試劑可以通過幾個簡單的步驟實現(xiàn)對所需目標(biāo)的靈敏檢測。
表1.TSA/PSA技術(shù)與傳統(tǒng)免疫熒光對比
TSA/PSA多標(biāo)免疫熒光 | 傳統(tǒng)免疫熒光 | |
靶點數(shù)目 | 不受限制(最多可同時染色7-10種) | 一般標(biāo)記3種(含DAPI),>3種標(biāo)記難度較大 |
一抗種類 | 同一種屬的不同抗體即可滿足要求 | 不同種屬的不同抗體 |
二抗種類 | 連接辣根過氧化物酶的同種屬二抗 | 連接熒光探針的不同種屬二抗 |
染色策略 | 任何樣本無需任何染色策略,簡單的重復(fù)前一步的染色過程,樣本/靶點的差異不影響染色過程,使用簡單方便 | 樣本抗原的空間位置的差異,需要設(shè)計復(fù)雜的染色策略。樣本/靶點的差異導(dǎo)致染色策略的差異,染色過程復(fù)雜、多變 |
染色效果 | 高染色分辨率和染色特異性,信號強度更強,更穩(wěn)定,淬滅時間更長,無背景影響,各靶點的信噪比大大提高,尤其適合組織基于單細胞的定量分析 | 亮度較弱,容易淬滅,各種抗體間存在互相影響,背景較高,對基于單細胞的定量分析不利。 |
實驗成本 |
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應(yīng)用范圍 | 二抗具備通用性,因此實驗室中所有的研究領(lǐng)域均可使用 | 二抗不具備通用性,實驗室中應(yīng)用領(lǐng)域受到局限 |
TSA/PSA特點
TSA | PSA |
1.適用廣,多色標(biāo)記 2.多重標(biāo)記可避免抗體種屬交叉問題 3.染色特異性好,信號強度高,適合低豐度靶標(biāo) 4.石蠟切片樣本熒光染色背景干凈 |
1.檢測靈敏度提高了100多倍,比標(biāo)準(zhǔn)IHC,ICC,IF方法高出100倍 2.改進的熒光信號比酪胺(TSA)試劑高10至50倍 3.PSA 自由基的更高反應(yīng)性允許在HRP-靶相互作用位點更快速,有效和更穩(wěn)定地標(biāo)記Styramide綴合物。 4.在不犧牲靈敏度的情況下,PSA可以使用更少量的抗體/探針 |
實驗結(jié)果展示
圖2.分別用iFluor 488 PSA和Alexa Fluor 488 TSA染色甲醛固定的石蠟包埋人肺腺癌陽性組織的染色結(jié)果圖。人肺腺癌陽性組織切片用兔抗EpCam抗體染色,然后用polyHRP標(biāo)記的山羊抗兔IgG二抗孵育,最后使用iFluor 488 PSA (Cat#45020)和Alexa Fluor 488 TSA分別染色。圖像顯示iFluor 488 PSA與Alexa Fluor 488 TSA相比提高了熒光IHC的靈敏度。
圖3.分別用iFluor 488 酪胺和Alexa Fluor 488 酪胺染色甲醛固定的石蠟包埋人肺腺癌陽性組織的染色結(jié)果圖。人肺腺癌陽性組織切片用兔抗EpCam抗體染色,然后用HRP標(biāo)記的山羊抗兔IgG二抗孵育。顯影:iFluor 488 酪胺(左);Alexa Fluor 488 酪胺(右)。核染色:DAPI
圖4.Styramide 超級信號放大試劑盒的信號強度對比。 (A)將HeLa細胞固定,透化并用各種濃度的兔抗微管蛋白一抗標(biāo)記,建議的稀釋濃度為:1:500。 然后將細胞直接與AlexaFluor488綴合的山羊抗兔IgG二抗染色,最后分別與HRP標(biāo)記的山羊抗兔IgG二抗、AlexaFluor 488酪胺和iFluor 488 Styramide(#45205)染色。 使用FITC濾光片組拍攝熒光圖像,并以相同的曝光時間進行分析。 (B)測量相對熒光信號強度,并比較不同檢測方法之間的強度。
相關(guān)產(chǎn)品推薦
分類 | 貨號 | 產(chǎn)品名稱 | Ex(nm) | Em(nm) |
TSA試劑 | 45100 | iFluor 488 酪胺 | 491 | 514 |
45105 | iFluor 555 酪胺 | 552 | 567 | |
45110 | iFluor 647 酪胺 | 649 | 665 | |
11070 | AF488 酪胺 | 491 | 518 | |
11075 | AF546 酪胺 | 554 | 570 | |
11082 | AF594 酪胺 | 590 | 617 | |
11065 | Cy3 酪胺 | 555 | 565 | |
11066 | Cy5 酪胺 | 644 | 665 | |
11061 | Azido-Cy5酪胺 | 644 | 665 | |
PSA試劑 | 45000 | iFluor 350 Styramide | 345 | 442 |
45020 | iFluor 488 Styramide | 491 | 514 | |
45025 | iFluor 546 Styramide | 541 | 557 | |
45027 | iFluor 555 Styramide | 552 | 567 | |
45030 | iFluor 568 Styramide | 568 | 587 | |
45035 | iFluor 594 Styramide | 592 | 619 | |
45045 | iFluor 647 Styramide | 649 | 665 | |
45050 | iFluor 680 Styramide | 676 | 695 | |
45055 | iFluor 700 Styramide | 685 | 710 | |
45065 | iFluor 750 Styramide | 749 | 775 | |
45070 | iFluor 790 Styramide | 782 | 811 | |
試劑盒 | 45200 | iFluor 350 Styramide超級信號放大成像試劑盒,含羊抗兔IgG | 345 | 442 |
45205 | iFluor 488 Styramide超級信號放大成像試劑盒,含羊抗兔IgG | 491 | 514 | |
45220 | iFluor 555 Styramide超級信號放大成像試劑盒,含羊抗兔IgG | 552 | 567 | |
45230 | iFluor 594 Styramide超級信號放大成像試劑盒,含羊抗兔IgG | 592 | 619 | |
45240 | iFluor 647 Styramide超級信號放大成像試劑盒,含羊抗兔IgG | 649 | 665 |