健 康
 

肥胖、糖尿病、心血管疾病以及其他代謝綜合征范疇內(nèi)的相關(guān)疾病，是關(guān)系到我們健康最緊迫的問題，其中代謝相關(guān)的激素由內(nèi)分泌系統(tǒng)的各個(gè)器官，包括脂肪細(xì)胞、胰腺和胃腸道分泌。在調(diào)節(jié)能量、食物攝取量和全身代謝方面發(fā)揮著重要作用。

 

近些年，隨著II型糖尿病的發(fā)病率上升，代謝類疾病甚至已經(jīng)影響到兒童和青少年人群。所以加快代謝綜合征相關(guān)的激素研究，對(duì)代謝類疾病的治療和預(yù)防都至關(guān)重要。

 

因?yàn)榫S持系統(tǒng)的平衡狀態(tài)需要多個(gè)信號(hào)分子，所以沒有一個(gè)生物標(biāo)志物足以定義一個(gè)系統(tǒng)。另一方面，基于傳統(tǒng)的檢測(cè)手段，由于樣本容量的限制，一次測(cè)量多個(gè)分析物是難以完成的。

▲圖1：各種器官向大腦分泌的多種信號(hào)有助于維持食物攝入和能量消耗之間的平衡，調(diào)節(jié)體重和新陳代謝

  

為了克服這些挑戰(zhàn)，基于Luminex®xMAP®磁珠技術(shù)的MILLIPLEX®MAP多因子檢測(cè)試劑盒，可以實(shí)現(xiàn)同時(shí)定量代謝相關(guān)分析¹。MILLIPLEX®代謝激素檢測(cè)試劑盒的主要優(yōu)勢(shì)是包含：總GLP-1的檢測(cè)和活性GLP-1的高靈敏度檢測(cè)。 

產(chǎn)品詳情

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在此案例中，我們向您介紹一個(gè)多重、穩(wěn)定、靈敏的代謝激素多因子檢測(cè)試劑盒，可以同時(shí)檢測(cè)包括如下13種代謝激素： 

● 胰島激素	amylin (active or total)， C-peptide, glucagon, insulin 與pancreatic polypeptide (PP)
● 胃腸激素	active ghrelin, gastric inhibitory peptide (GIP), glucagon-like peptide 1 (GLP-1, active or total), 與 peptide YY (PYY)
● 脂肪因子	leptin, IL-6, monocyte chemotactic  protein-1 (MCP-1), 與 tumor necrosis factor(TNF )

 

除了評(píng)估整個(gè)試劑盒的準(zhǔn)確性和精密度外，我們還比較了MILLIPLEX^®活性GLP-1高靈敏度試劑盒與默克金標(biāo)準(zhǔn)高靈敏度活性GLP-1的ELISA法試劑盒，得到的檢測(cè)結(jié)果一致（貨號(hào)：EZGLPHS-35K）。

 

1 材料和方法

實(shí)驗(yàn)檢測(cè)使用：MILLIPLEX^®人類代謝激素檢測(cè)試劑盒(貨號(hào)：HMHEMAG-34K)，實(shí)驗(yàn)按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

 

為了確定代謝激素水平與食物攝入量的關(guān)系，我們采集了正常受試者(n=20)在禁食一晚或標(biāo)準(zhǔn)早餐后一小時(shí)的血液樣本。在采集的血樣中立即加入蛋白酶抑制劑(DPPIV抑制劑、AEBSF、蛋白酶抑制劑)。根據(jù)檢測(cè)方案，使用MILLIPLEX^®人代謝激素試劑盒，對(duì)血清和血漿樣品進(jìn)行分別進(jìn)行檢測(cè)。

 

同時(shí)，針對(duì)同一份樣本使用默克公司高靈敏度GLP-1 ELISA試劑盒(貨號(hào)：EZGLPHS-35K)進(jìn)行檢測(cè)，按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

 

2 結(jié) 果

使用血清基質(zhì)中連續(xù)稀釋的每種分析物的標(biāo)準(zhǔn)，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，以測(cè)定相對(duì)于分析物濃度的測(cè)定反應(yīng)(以平均熒光強(qiáng)度[MFI]測(cè)量)(圖2B)。

 

標(biāo)準(zhǔn)曲線為所有因子設(shè)定用于檢測(cè)的線性度超過3~5個(gè)數(shù)量級(jí)（圖2A），試劑盒內(nèi)所有因子未見交叉反應(yīng)(數(shù)據(jù)未展示)。根據(jù)檢測(cè)數(shù)據(jù)顯示，MILLIPLEX^®回收率達(dá)94%~107%，精度好(小于10%的板內(nèi)變異系數(shù)[CV]和15-20%的板間變異系數(shù)(圖2A)。

 ▲ 圖2A

 

▲圖2B:驗(yàn)證數(shù)據(jù)(2A)和標(biāo)準(zhǔn)曲線(2B)使用血清基質(zhì)稀釋，并使用MILLIPLEX®MAP 人類代謝激素試劑盒（Cat. No. HMHEMAG-34K）

 

接下來(lái)，我們?cè)u(píng)估了MILLIPLEX^®試劑盒檢測(cè)生物樣品的性能。

 

正如之前的預(yù)期，多種代謝激素水平會(huì)隨著食物的攝入而發(fā)生變化(血清中C-Peptide, GIP, active GLP-1與Insulin水平升高，如圖3A所示)。將匹配的人血清和血漿樣本進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)大多數(shù)分析物的血清和血漿樣本濃度非常接近(數(shù)據(jù)如圖3B所示)。

▲圖3：使用MILLIPLEX^®多因子試劑盒檢測(cè)人類空腹或餐后受試者血清(樣本中已加蛋白酶抑制劑)和血漿中的代謝激素。血清C-Peptide, GIP, active GLP-1和Insulin (3A)均有預(yù)期升高。從相關(guān)曲線(3B)中的斜率和R值可以看出，血清分析物水平與血漿分析物水平比較具有良好的相關(guān)性

 

我們分別使用MILLIPLEX^®人類代謝激素檢測(cè)試劑盒與目前已證實(shí)穩(wěn)定的默克高敏活性GLP-1 ELISA試劑盒同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)，并比較了活性GLP-1的定量檢測(cè)結(jié)果（圖4）：
 

● 使用GLP-1重組蛋白，按照一定比例進(jìn)行梯度稀釋建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，最終顯示出幾乎一致的反應(yīng)結(jié)果數(shù)據(jù)和分析的線性范圍(圖4A)；
● 使用MILLIPLEX^®多因子技術(shù)與ELISA技術(shù)分別檢測(cè)生物樣品中GLP-1的表達(dá)水平，并進(jìn)行比較后(圖4B)，顯示這兩種方法檢測(cè)結(jié)果具有很好的相關(guān)性。

 

▲圖4：MILLIPLEX^® GLP-1(活性)檢測(cè)結(jié)果與GLP-1(活性)ELISA檢測(cè)結(jié)果(4A)的相關(guān)性，血清樣本(4B)和空腹與餐后受試者的比較(4C和4D)

 

 

3 討 論 

通過以上的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，MILLIPLEX^®人類代謝激素檢測(cè)試劑盒與其他商業(yè)上可用的多重檢測(cè)試劑盒進(jìn)行比較，該試劑盒操作更加友好、結(jié)果更加準(zhǔn)確，檢測(cè)性能與其他供應(yīng)商的試劑盒相似或更好。該代謝相關(guān)激素檢測(cè)試劑盒，在代謝疾病和其他相關(guān)病理生理學(xué)領(lǐng)域的基礎(chǔ)研究和臨床研究中，有潛力成為一個(gè)非常有用的工具。

 

代謝研究相關(guān)MILLIPLEX^®試劑盒▼

Name	Analytes	Cat. No.
Human Adipokine Panel 1 (Serum/Plasma samples)	Adiponectin, Adipsin/FactorD/NGAL/Lipocalin-2, PAI-1 (total), Resistin	HADK1MAG-61K
Human Adipokine Panel 2 (Serum/Plasma samples)	HGF, IL-1β, IL-6, IL-8/CXCL8, Insulin, Leptin, MCP-1/CCL2, NGF, TNFα	HADK2MAG-61K
Human Adipocyte (Cell culture samples)	Adiponectin, HGH, IL-1β , Il-6, IL-8/CXCL8, Leptin, MCP-1/CCL2, NGF,PAI-1  (total), Resistin, TNFα	HADCYMAG-61K
Human            Myokine	Apelin, BDNF, Erythropoietin (EPO), FABP3, FGF21, Fractalkine/CX3CL1,FSTL1, IL-6, IL-15, Irisin, LIF, Myostatin/GDF8, Oncostatin-M (OSM),Osteocrin/Musclin, Osteonectin/SPARC	HMYOMAG-56K
Human Pituitary Panel 1	ACTH, Agouti-Related Protein (AgRP), CNTF, FSH, GH, LH, TSH	HPTP1MAG-66K
Multi-Species Steroid/Thyroid Hormone	Cortisol, Estradiol, Progesterone, T3, T4,Testosterone	MSHMAG-21K

 

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參考文獻(xiàn)

 

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