DNA是攜帶生物體遺傳信息的重要分子,它的完整性對(duì)細(xì)胞存活至關(guān)重要。然而,在生命活動(dòng)中,DNA時(shí)刻遭受著內(nèi)源性(氧化自由基、復(fù)制叉崩塌等)或外源性(電離輻射、烷化劑等)刺激,DNA損傷不可避免。
檢測(cè)DNA損傷的方法有很多,根據(jù)其原理大致可以分為3類: 基于損傷DNA理化性質(zhì)的改變檢測(cè)DNA損傷、基于分子雜交檢測(cè)DNA損傷以及基于DNA損傷后形成的產(chǎn)物檢測(cè)DNA損傷。前兩種方法是基于熒光標(biāo)記直接觀測(cè)DNA的損傷情況,而基于DNA損傷后形成的產(chǎn)物檢測(cè)DNA損傷是通過標(biāo)記物的檢測(cè)間接反映DNA的損傷程度。
檢測(cè)原理 | 檢測(cè)技術(shù) | 所檢測(cè)DNA損傷類型 |
基于損傷DNA理化性質(zhì)的改變檢測(cè) | 彗星實(shí)驗(yàn) | 鏈斷裂及堿不穩(wěn)定位點(diǎn) |
基于分子雜交檢測(cè) | 熒光原位雜交法 | 鏈斷裂 |
基于DNA損傷后形 成產(chǎn)物檢測(cè) |
yH2AX | 鏈斷裂 |
8-OHdG | DNA化學(xué)修飾 | |
TUNEL | 細(xì)胞凋亡所致DNA鏈斷裂 |
※ 基于DNA損傷后形成產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)
DNA損傷過程中可形成某些特定的損傷產(chǎn)物,可通過檢測(cè)損傷產(chǎn)物(磷酸化H2AX、8-OHdG等)來(lái)評(píng)估DNA損傷。也可標(biāo)記損傷DNA,如末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的脫氧尿苷三磷酸標(biāo)記(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL),通過標(biāo)記物的檢測(cè)間接反映DNA的損傷程度。
1.雙鏈斷裂標(biāo)志物磷酸化H2AX檢測(cè)法
H2AX是組蛋白H2A家族成員之一,包含一個(gè)進(jìn)化保守區(qū)域SQ位于真核細(xì)胞的C末端,分子量為14KD,139位有個(gè)絲氨酸殘基,在細(xì)胞發(fā)生DNA雙鏈斷裂后的數(shù)分鐘內(nèi),將會(huì)被ATM,ATR和PRKDC磷酸化,形成γH2AX,進(jìn)而迅速招募DNA修復(fù)蛋白和凋亡蛋白到損傷部位,每個(gè)雙鏈的斷裂區(qū)會(huì)有成百上千的γ-H2AX,然后在1h左右數(shù)量和密度達(dá)到峰值。由于γH2AX的出現(xiàn)與DNA雙鏈斷裂緊密關(guān)聯(lián),是目前國(guó)內(nèi)外研究細(xì)胞DNA雙鏈斷裂應(yīng)激反應(yīng)的熱點(diǎn)之一,同時(shí)也可以作為DNA雙鏈斷裂的標(biāo)志物。
由于與DNA雙鏈斷裂緊密相關(guān),γH2AX可以作為雙鏈修復(fù)的標(biāo)志物,艾美捷可為您提供完備的H2AX檢測(cè)產(chǎn)品:
γH2AX檢測(cè)試劑盒:
貨號(hào) | 名稱 | 描述 | 規(guī)格 |
P-6001-096 | EpiQuik In Situ DNA Damage Assay Kit 原位DNA損傷檢測(cè)試劑盒 |
通過原位檢測(cè)磷酸化H2AX Ser139評(píng)估DNA損傷 | 96 assays |
H2AX&γH2AX相關(guān)抗體:
類型 | 貨號(hào) | 名稱 | 應(yīng)用 |
H2AX抗體 | MAB20144 | H2AFX monoclonal antibody, clone BIA-8 | WB-Ce、IHC-P、ICC、IF、IP |
MAB12802 | Histone H2AX monoclonal antibody, clone RM214 | WB-Ce、ICC、ELISA | |
PAB8764 | H2AFX polyclonal antibody | WB-Ce、IHC、IP | |
γH2AX抗體 | MAB15279 | Histone H2AX (phospho S139) monoclonal antibody, clone 2A9-B5 | WB-Ce、IF |
MAB15111 | Histone H2AX (phospho S139) monoclonal antibody, clone RM224 | WB-Ce、ICC、IF | |
MAB21809 | H2AFX (phospho S139) monoclonal antibody | WB、 IHC-P、 IF、 IP |
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2.氧化損傷標(biāo)志物8-OHdG檢測(cè)法
DNA氧化損傷產(chǎn)物中,作為DNA中脫氧鳥苷(dG)的羥基加合物,8-羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)因其形成量大,影響因素少,已被公認(rèn)為最能反映體內(nèi)DNA氧化損傷程度的生物標(biāo)志物。
OHdG檢測(cè)試劑盒:
貨號(hào) | 名稱 | 規(guī)格 |
P-6003-48 | EpiQuik 8-OHdG DNA Damage Quantification Direct Kit (Colorimetric) 8-OHdG DNA損傷定量檢測(cè)試劑盒(比色法) |
48 assays |
P-6003-96 | 96 assays |
8-OHdG相關(guān)抗體:
貨號(hào) | 名稱 | 應(yīng)用 |
MAB6116 | 8-OHdG monoclonal antibody, clone N45.1 | IHC |
3.DNA斷片標(biāo)記法
原位末端標(biāo)記法(TdT-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)是一種檢測(cè)凋亡細(xì)胞DNA鏈斷裂片段的方法。細(xì)胞凋亡發(fā)生時(shí),內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶將DNA降解成片段,在脫氧核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶的作用下,底物dUTP 或BrDU(無(wú)或有熒光標(biāo)記)可連接到DNA斷片的3-OH末端,采用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀對(duì)標(biāo)記物進(jìn)行分析,實(shí)現(xiàn)在單細(xì)胞水平檢測(cè)凋亡細(xì)胞的DNA碎片。
貨號(hào) | 名稱 | 樣本類型 |
KA0773 | In Situ BrdU DNA Fragmentation Assay Kit | 細(xì)胞、組織 |
KA0775 | In Situ BrdU DNA Fragmentation Assay Kit (IHC) | 細(xì)胞、組織 |
KA0776 | In Situ BrdU DNA Fragmentation Assay Kit (Red) | 細(xì)胞、組織 |
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